Dirett RT-qPCR Kit
Deskrizzjoni
Il-Kit RT-qPCR dirett jipprovdi buffer RT-qPCR ippakkjat separatament u enzima effiċjenti għoljataħlita (Taq、M-MLV、RI), li tagħmilha konvenjenti għall-ħolqien ta 'kits u sistema back-endaġġustament, fi ħdan verifika sempliċi.
Speċifikazzjonijiet
500T, 50,000T
Komponenti tal-kit
Kontenut tal-kit (20 μL sistema ta' reazzjoni) | IM-05111-01 | IM-05112-01 |
500 T | 50,000 T | |
Taħlita ta' Enżimi Diretti | 500 μL×1 | 50 mL×1 |
2 × Buffer RT-qPCR Dirett | 1 mL×5 | 500 mL×1 |
Istruzzjoni | 1 | 1 |
Passi Operattivi
Qabel il-preparazzjoni tar-reaġenti, ir-reaġenti kollha fil-kit għandhom jinħallu f'temperatura tal-kamra u mħallta bil-mod.
A: Ipprepara of mudell u reaġent
1. Ipprepara mudell ta 'RNA ppreparat (Huwa rakkomandat li tuża kit tas-serje Foregene Total RNA Isolation Kit biex tiġbed u tippurifika RNA template) jew prodott ta' qsim tal-kampjun (Huwa rakkomandat li tuża sistema Foregene Lysis), primers speċifiċi (10 μM) u konsumabbli rilevanti oħra, strument.
2. Poġġi l-2 × RT-qPCR Buffer Dirett, RNase-Free ddH2O u 20 × ROX Reference Dye (jekk's meħtieġa) fil-kaxxa bis-silġ, jagħmlu dawn jiddewweb b'mod naturali, u mħallta bil-mod.
B: Ipprepara of RT-qPCR sistema
Tabella 1 : Ipprepara of RT-qPCR ssistema
Komponent | Volum | Konċentrazzjoni finali |
2 × Buffer RT-qPCR Dirett | 10 μL | 1× |
Taħlita ta' Enżimi Diretti | 1μL | |
Il-Primer quddiem (10 μM) | 0.8 μL | 50-900nM |
Reverse Primer (10 μM) | 0.8 μL | 50-900nM |
Sonda (4 μM) | 1μL | 200nM |
Mudell (RNA jew Lysate) | X μL | |
Żebgħa ta 'referenza 20 × ROX | - | 1* |
RNase-FreeddH2O | (6.4-X) μL | |
Volum Totali | 20μL |
C: Issettja il RT-qPCR reazzjoni programm
Tabella 2 : RT-qPCR reaction programm iffissar (għal eżempju: tnejn-pass metodu)
Pass | Temperatura | Ħin | Ċikli | Kontenut | |
1 | 50℃ | 15 min | 1* | 1 | Traskrizzjoni inversa |
2 | 95℃ | 1 min | 1 | Denaturazzjoni minn qabel | |
3 | 95℃ | 10 sek | 40-45 | Denaturazzjoni | |
60℃ | 30 sek 2* | Ittemprar/Estensjoni |
Ħażna u Żmien kemm idum tajjeb
-Il-kit għandu jinħażen f'-20± 5℃.Il-perjodu ta' validità huwa ta' 12-il xahar.
-Evita ċikli ripetuti ta' ffriżar u tidwib (<5 ċikli).