Ċellula Total RNA Isolation Kit Total RNA Iżolament Purifikazzjoni Kits minn ċellula
Deskrizzjoni tal-Kit:
RNA totali purifikat ħafna u ta 'kwalità għolja jista' jinkiseb minn diversi ċelloli kkultivati fi 11-il minuta.
Ħieles mill-RNase
Mħaddma f'temperatura tal-kamra (15-25 ℃)
Bil-Kolonna tat-Tindif tad-DNA
Rendiment għoli ta 'RNA
Fast: Lesti l-estrazzjoni fi 11-il minuta
Sigurtà: Xejn Kimika organika
Deskrizzjoni
Dan il-kit juża l-kolonna spin u l-formula żviluppati minn Foregene, li jistgħu estratt b'mod effiċjenti RNA totali ta 'purità għolja u ta' kwalità għolja minn ċelloli kkultivati f'pjanċi ta '96, 24, 12, u 6-well.
Il-kit jipprovdi Kolonna effiċjenti tat-Tindif tad-DNA, li tista 'faċilment tissepara s-supernatant u l-lisat taċ-ċelluli, jorbot u tneħħi d-DNA ġenomika.L-operazzjoni hija sempliċi u tiffranka l-ħin.
TIl-Kolonna tal-RNA biss tista' torbot lill-RNA b'mod effiċjenti b'formula unika.Numru kbir ta 'kampjuni jistgħu jiġu pproċessati simultanjament.
Komponenti tal-kit
| Kompożizzjoni tal-kit | RE-03111 | RE-03114 |
| 50 T | 200 T | |
| Buffer cRL1* | 25 mL | 100 mL |
| Buffer cRL2 | 15 mL | 60 mL |
| Buffer RW1* | 25 mL | 100 mL |
| Buffer RW2 | 24 mL | 96 mL |
| Ħieles mill-RNase ddH2O | 10 mL | 40 mL |
| Kolonna RNA biss | 50 | 200 |
| Kolonna tat-Tindif tad-DNA | 50 | 200 |
| Istruzzjoni | 1 | 1 |
*Jekk jogħġbok ilbes ingwanti u ħu miżuri protettivi waqt l-operazzjoni peress li Buffer cRL1 u Buffer RW1 fihom melħ kaotropiku irritanti.
Karatteristiċi u vantaġġi
■ Il-proċess kollu jitħaddem f'temperatura tal-kamra (15-25℃), mingħajr banju tas-silġ u ċentrifugazzjoni f'temperatura baxxa.
■ Il-kit kollu huwa RNase-Free, m'hemmx għalfejn tinkwieta dwar id-degradazzjoni tal-RNA.
■ Il-Kolonna tat-Tindif tad-DNA tgħaqqad speċifikament id-DNA, sabiex il-kit ikun jista 'jneħħi l-kontaminazzjoni tad-DNA ġenomika mingħajr ma żżid DNase addizzjonali.
■ Rendiment għoli ta 'RNA: Kolonna ta' RNA biss u formula unika jistgħu jippurifikaw l-RNA b'mod effiċjenti.
■ Veloċità mgħaġġla: faċli biex topera u tista 'titlesta fi 11-il minuta.
■ Sigurtà: L-ebda reaġent organiku mhu meħtieġ.
■ Kwalità għolja: L-RNA purifikat huwa ta 'purità għolja, ħieles minn proteini u impuritajiet oħra, u jista' jilħaq diversi esperimenti sussegwenti.
Applikazzjoni tal-kit
Huwa adattat għall-estrazzjoni u l-purifikazzjoni ta 'RNA totali minn ċelloli kkultivati f'pjanċi ta' 96, 24, 12, u 6-well.
Fluss tax-xogħol
Dijagramma
Id-dijagramma tal-batterija tal-ġel tal-agarose ta 'Cell Total RNA Isolation Kit ittrattat in-numri differenti ta' ċelloli ta 'hawn fuq, 20μl eluzzjoni ta' volum, ħu 2μl RNA totali purifikat 1%.
Ħażna u ħajja fuq l-ixkaffa
Il-kit jista 'jinħażen għal 12-il xahar f'temperatura tal-kamra (15-25 ℃) jew 2-8 ℃ għal żmien itwal (24 xahar).
Buffer cRL1 jista 'jinħażen f'4 ℃ għal xahar wara li żżid 2-hydroxy-1-ethanethiol (mhux obbligatorju).
L-RNA ma jiġix estratt jew ir-rendimenti tal-RNA huma baxxi
Ħafna drabi jkun hemm varjetà ta 'fatturi li jaffettwaw l-effiċjenza tal-irkupru, bħal: kontenut ta' RNA tal-kampjun tat-tessut, metodu ta 'tħaddim, volum ta' elużjoni, eċċ.
1. Banju tas-silġ jew ċentrifugazzjoni krijoġenika (4 °C) saret waqt it-tħaddim.
Rakkomandazzjoni: Opera f'temperatura tal-kamra (15-25 ° C) matul il-proċess kollu, m'għandekx banju tas-silġ u ċentrifuga f'temperaturi baxxi.
2. Preservazzjoni mhux xierqa tal-kampjun jew ħin eċċessiv tal-ħażna tal-kampjun.
Rakkomandazzjoni: Aħżen il-kampjuni f'-80 °C jew iffriżar f'nitroġenu likwidu u evita l-użu ripetut ta 'friża u tinħall;ipprova uża tessut frisk jew ċelloli kkultivati għall-estrazzjoni tal-RNA.
3. Liżi tal-kampjun insuffiċjenti.
Rakkomandazzjoni: Meta t-tessut ikun omoġenizzat, kun żgur li t-tessut ikun omoġenizzat biżżejjed u li ċ-ċelloli tat-tessuti huma maqsuma biżżejjed biex jispjegaw ir-rilaxx tal-RNA.
4. L-eluwent mhux miżjud b'mod korrett.
Rakkomandazzjoni: Ikkonferma li RNase-Free ddH2O huwa miżjud qatra fin-nofs tal-membrana tal-kolonna tal-purifikazzjoni.
5. Il-volum korrett ta' etanol assolut ma ġiex miżjud ma' Buffer RL2 jew Buffer RW2.
Rakkomandazzjoni: Segwi l-istruzzjonijiet, żid il-volum korrett ta 'etanol assolut ma' Buffer RL2 u Buffer RW2 u ħawwad sew qabel tuża l-kit.
6. Id-dożaġġ tal-kampjun tat-tessut mhuwiex xieraq.
Rakkomandazzjoni: Uża 10-20 mg ta 'tessut jew (1-5) × 106ċelluli għal kull 500 μl buffer RL1, peress li l-użu eċċessiv tat-tessut jista 'jirriżulta f'estrazzjoni ta' RNA mnaqqsa.
7. Volum ta 'elużjoni mhux xieraq jew elużjoni mhux kompluta.
Rakkomandazzjoni: Il-volum ta 'eluzzjoni tal-kolonna tal-purifikazzjoni huwa 50-200 μl;jekk l-effett ta 'elużjoni ma jkunx sodisfaċenti, huwa rakkomandat li jiġi estiż il-ħin tat-tqegħid fit-temperatura tal-kamra wara li żżid ddH Ħieles minn RNase imsaħħan minn qabel2O, eż. għal 5-10 min.
8.Il-kolonna ta 'purifikazzjoni għandha residwu ta' etanol wara l-ħasil tal-Buffer RW2.
Rakkomandazzjoni: Jekk ikun hemm residwu tal-etanol wara l-ħasil tal-Buffer RW2, ċentrifugazzjoni ta 'tubu vojt għal 1min, il-ħin għall-operazzjoni ta' ċentrifugazzjoni ta 'tubu vojt jista' jiżdied għal 2min, jew il-kolonna ta 'purifikazzjoni tista' titqiegħed f'temperatura tal-kamra għal 5 min biex tneħħi b'mod adegwat l-etanol residwu.
RNA purifikat huwa degradat
Il-kwalità tal-RNA purifikat hija relatata ma 'fatturi bħall-preservazzjoni tal-kampjun, kontaminazzjoni RNase, u manipulazzjoni, eċċ.
1. Il-kampjuni tat-tessuti ma jinżammux fil-ħin.
Rakkomandazzjoni: Jekk il-kampjuni tat-tessuti jew iċ-ċelloli ma jintużawx fil-ħin wara l-ġbir, ippriserva immedjatament krijopreserva f'-80 °C jew nitroġenu likwidu.Biex tiġbed l-RNA, uża kampjun tat-tessut jew taċ-ċelluli li jkun għadu kif ttieħed kull meta jkun possibbli.
2. Iffriżar-tidwib ripetut tal-kampjuni tat-tessuti.
Rakkomandazzjoni: Meta taħżen kampjuni tat-tessuti, huwa aħjar li tnaqqashom f'biċċiet żgħar għall-preservazzjoni, u neħħi waħda mill-biċċiet meta tużahom biex tevita tidwib ripetut tal-friża tal-kampjun u d-degradazzjoni tal-RNA.
3. RNase jiġi introdott jew le liebes ingwanti, maskri, eċċ li jintremew wara l-operazzjoni.
Rakkomandazzjoni: L-esperimenti ta 'estrazzjoni ta' RNA jsiru l-aħjar fi kmamar separati ta 'manipulazzjoni ta' RNA u t-tabella titneħħa qabel l-esperiment.
Ilbes ingwanti u maskri li jintremew waqt l-esperiment biex timminimizza d-degradazzjoni tal-RNA kkawżata mill-introduzzjoni ta 'RNase.
4. Ir-reaġenti huma kkontaminati b'RNase waqt l-użu.
Rakkomandazzjoni: Ibdel b'Kit ġdid għall-Iżolament tal-RNA Totali tal-Annimali għal esperimenti relatati.
5. It-tubi taċ-ċentrifugi, il-ponot, eċċ użati fil-manipulazzjoni tal-RNA huma kkontaminati b'RNase.
Rakkomandazzjoni: Ikkonferma li t-tubi taċ-ċentrifugi, il-ponot, il-pipetti, eċċ użati fl-estrazzjoni tal-RNA huma kollha Ħieles mill-RNase.
L-RNA miksub purifikat jaffettwa l-esperimenti downstream
RNA purifikat mill-kolonna tal-purifikazzjoni, jekk il-jonji tal-melħ, il-kontenut tal-proteini huwa kbir wisq jaffettwa l-esperiment downstream, bħal: traskrizzjoni inversa,Northern Blot et al.
1. L-RNA elutionit għandu residwi tal-jone tal-melħ.
Rakkomandazzjoni: Ikkonferma li l-volum korrett ta 'etanol ġie miżjud mal-Buffer RW2 u wettaq 2 ħasliet ta' kolonna ta 'purifikazzjoni bil-veloċità ċentrifugali indikata għat-tħaddim;jekk ikun hemm xi residwu tal-jone tal-melħ, ħalli l-kolonna tal-purifikazzjoni għal Buffer RW2 għal 5 min f'temperatura tal-kamra u wettaq ċentrifugazzjoni biex timmassimizza t-tneħħija tal-kontaminazzjoni tal-melħ.
2. Residwu ta' etanol f'RNA elutionit.
Rakkomandazzjoni: Ikkonferma li wara l-ħasil tal-buffer RW2, wettaq l-operazzjoni ta 'ċentrifugazzjoni ta' tubu vojt bil-veloċità ta 'ċentrifugazzjoni indikata għall-operazzjoni, żid il-ħin tal-operazzjoni ta' ċentrifugazzjoni ta 'tubu vojt għal 2 min jekk għad hemm residwu ta' etanol, jew ħallih f'temperatura tal-kamra għal 5 m
