Cell Direct RT qPCR Kit—SYBR GREEN I Direct Cell Lysis Cell Ready Kits qRT-PCR f'pass wieħed
Deskrizzjonijiet
Dan il-kit juża sistema unika tal-liżi buffer li tista 'malajr tirrilaxxa RNA minn kampjuni ta' ċelluli kkultivati għal reazzjonijiet RT-qPCR, u b'hekk telimina l-proċess ta 'purifikazzjoni tal-RNA li jieħu ħafna ħin u impenjattiv.Il-mudell RNA jista 'jinkiseb f'7 minuti biss.Il-5×Ħallat RT dirett u 2×Ir-reaġenti diretti qPCR Mix-SYBR ipprovduti mill-kit jistgħu jiksbu malajr u b'mod effettiv riżultati PCR kwantitattivi f'ħin reali.
5×Ħallat RT dirett u 2×QPCR dirett Mix-SYBR għandu tolleranza qawwija ta 'inibitur, u l-lysate tal-kampjuni jista' jintuża bħala l-mudell għal RT-qPCR direttament.Dan il-kit fih l-RNA uniku ta 'affinità għolja Foregene reverse transcriptase, u Hot D-Taq DNA polymerase, dNTPs, MgCl2, buffer tar-reazzjoni, PCR optimizer u stabilizzatur.
Speċifikazzjonijiet
200×20μl Rxns, 1000×20μl Rxns
Komponenti tal-kit
| Parti I | Buffer CL |
| Foregene Protease Plus II | |
| Buffer ST | |
| Parti II | Eraser tad-DNA |
| 5 × Ħallat RT Dirett | |
| 2 × Dirett qPCR Mix-SYBR | |
| 50 × Żebgħa ta 'Referenza ROX | |
| Ħieles mill-RNase ddH2O | |
| Istruzzjonijiet | |
Karatteristiċi u vantaġġi
■Sempliċi u effettiva: bit-teknoloġija Cell Direct RT, il-kampjuni tal-RNA jistgħu jinkisbu f'7 minuti biss.
■ Id-domanda tal-kampjun hija żgħira, jistgħu jiġu ttestjati baxxi daqs 10 ċelloli.
■ Produzzjoni għolja: tista 'malajr tiskopri RNA f'ċelloli kkultivati fi pjanċi ta' 384, 96, 24, 12, 6-well.
■ DNA Eraser jista 'malajr ineħħi ġenomi rilaxxati, inaqqas ħafna l-impatt fuq riżultati sperimentali sussegwenti.
■ Is-sistema ottimizzata RT u qPCR tagħmel it-traskrizzjoni inversa RT-PCR f'żewġ stadji aktar effiċjenti u PCR aktar speċifika, u aktar reżistenti għall-inibituri tar-reazzjoni RT-qPCR.
Applikazzjoni tal-kit
Skop ta' applikazzjoni: ċelloli kkultivati.
- RNA rilaxxat b'liżi tal-kampjun: applikabbli biss għall-mudell RT-qPCR ta' dan il-kit.
- Il-kit jista 'jintuża għall-għanijiet li ġejjin: analiżi tal-espressjoni tal-ġeni, verifika tal-effett ta' sajlenser tal-ġeni medjat minn siRNA, screening tad-droga, eċċ.
Dijagramma
Ħażna u Żmien kemm idum tajjeb
Parti I ta 'dan il-kit għandha tinħażen f'4℃;Il-Parti II għandha tinħażen f'-20℃.
Foregene Protease Plus II għandu jinħażen f'4℃, tiffriżax f'-20℃.
Reaġent 2×Direct qPCR Mix-SYBR għandu jinħażen f'-20℃fid-dlam;jekk jintuża ta 'spiss, jista' wkoll jinħażen f'4℃ għal ħażna għal żmien qasir (uża fi żmien 10 ijiem).
Prinċipji tad-disinn tal-primer tal-PCR Real Time
Forward Primer u Reverse Primer
Għal Real Time PCR, id-disinn tal-primer huwa importanti ħafna.Primers huma relatati mal-ispeċifiċità u l-effiċjenza tal-amplifikazzjoni tal-PCR, u jistgħu jiġu ddisinjati b'referenza għall-prinċipji li ġejjin:
Tul tal-primer: 18-30bp.
Kontenut GC: 40-60%.
Valur Tm: Softwer tad-disinn Primer, bħal Primer 5, jista 'jagħti l-valur Tm tal-primer.Il-valuri Tm tal-primers upstream u downstream għandhom ikunu qrib kemm jista' jkun.Il-formula tal-kalkolu Tm tista' tintuża wkoll: Tm = 4 °C (G + C) + 2 °C (A + T).Meta twettaq PCR, temperatura taħt il-valur Tm primer ta '5 °C ġeneralment tintgħażel bħala t-temperatura tal-ittemprar (iż-żieda korrispondenti fit-temperatura tal-ittemprar tista' żżid l-ispeċifiċità tar-reazzjoni tal-PCR).
Primers u prodotti PCR:
Disinn primer PCR amplifikazzjoni tul tal-prodott huwa preferibbilment 100-150bp.
Primers tad-disinn fiż-żona strutturali sekondarja tal-mudell għandhom jiġu evitati kemm jista 'jkun.
Evita l-formazzjoni ta’ 2 bażijiet komplementari jew aktar bejn it-truf 3′ ta’ primers upstream u downstream.
Primer 3′ bażi terminali ma tistax tkun preżenti bi 3 G jew C konsekuttivi addizzjonali.
Il-primers infushom ma jistgħux ikollhom strutturi komplementari, inkella se tiġi ffurmata struttura ta 'hairpin, li taffettwa l-amplifikazzjoni tal-PCR.
ATCG għandu jitqassam bl-aktar mod uniformi possibbli fis-sekwenza tal-primer, u l-bażi terminali 3′ għandha tiġi evitata bħala T.
Appendiċi 1:Pakkett ta' supplimenti ta' komponenti ta' Cell Direct RT-qPCR Kit
1.Soluzzjoni tal-Liżi taċ-Ċelloli
|
| |||
| Komponenti tal-kit (sistema ta’ liżi ta’ 24-bir/bir) | DRT-01011-A1 | DRT-01011-A2 | |
| 100 T | 500 T | ||
| PartiI | Buffer CL | 20 ml | 100 ml |
| Foregene Protease Plus II | 400 μl | 1 ml × 2 | |
| Buffer ST | 1 ml × 2 | 10 ml | |
| PartiII | Eraser tad-DNA | 400 μl | 1 ml × 2 |
2.RT Ħallat
|
| |
| Komponenti tal-kit (20 μl sistema ta' reazzjoni) | DRT-01011-B1 |
| 200 T | |
| 5 × Ħallat RT Dirett | 800 μl |
| Ħieles mill-RNase ddH2O | 1.7 ml × 2 |
|
| ||
| Komponenti tal-kit (20 μl sistema ta' reazzjoni) | DRT-01011-C1 | DRT-01011-C2 |
| 200 T | 1000 T | |
| 2 × Dirett qPCR Mix-SYBR | 1 ml × 2 | 1.7 ml × 6 |
| 50 × Żebgħa ta 'Referenza ROX | 40 μl | 200 μl |
| Ħieles mill-RNase ddH2O | 1.7 ml | 10 ml |
Manwali ta' Istruzzjonijiet:
