Kitt ta 'Iżolament ta' l-RNA Totali ta 'l-Annimali Kits ta' Estrazzjoni u Purifikazzjoni ta 'RNA Totali għal Tessuti ta' Annimali & Ċellola
Deskrizzjoni tal-Kit:
Estratt malajr u b'mod effiċjenti RNA totali ta 'purità għolja u ta' kwalità għolja minn diversi tessuti tal-annimali.
M'hemmx għalfejn tinkwieta dwar id-degradazzjoni tal-RNA.Is-sistema kollha hija RNase-Free
Neħħi d-DNA b'mod effettiv billi tuża l-Kolonna tat-Tindif tad-DNA
Neħħi d-DNA mingħajr ma żżid DNase
Sempliċi—l-operazzjonijiet kollha jitlestew f'temperatura tal-kamra
Fast-operazzjoni tista 'titlesta fi 30 minuta
Sikur - l-ebda reaġent organiku użat
Purità għolja—OD260/280≈1.8-2.1
Kits Deskrizzjonijiet
50 Preparazzjoni, 200 Preparazzjoni
Dan il-kit juża l-spin kolonna u formulażviluppata mill-kumpanija tagħna, li tista 'estratt RNA totali ta' purità għolja u ta 'kwalità għolja minn diversi tessuti tal-annimali b'effiċjenza għolja. Tipprovdi Kolonna effiċjenti ta' Tindif tad-DNA, li tista 'faċilment tissepara u tassorbi DNA ġenomika mis-supernatant u lisat tat-tessuti, sempliċi u li tiffranka l-ħin;Kolonna ta 'RNA biss tista' torbot RNA b'mod effiċjenti u tista 'tiġi pproċessata simultanjament b'formula unika Lottijiet ta' kampjuni.
Is-sistema kollha hija RNase-Free, sabiex l-RNA estratt ma jiġix degradat;Buffer RW1, Buffer RW2 sistema tal-ħasil tal-buffer, sabiex l-RNA miksub ikun ħieles minn proteini, DNA, joni, u tniġġis ta 'kompost organiku.
Komponenti tal-kit
| Kit ta' iżolament ta' l-RNA totali ta' l-Annimali | ||
| Komponenti tal-kit | RE-03011 | RE-03014 |
| 50 T | 200 T | |
| Buffer RL1* | 25ml | 100ml |
| Buffer RL2 | 15ml | 60ml |
| Buffer RW1* | 25ml | 100ml |
| Buffer RW2 | 24ml | 96ml |
| Ħieles mill-RNase ddH2O | 10ml | 40ml |
| Kolonna tal-RNA biss | 50 | 200 |
| Kolonna tat-Tindif tad-DNA | 50 | 200 |
| Manwal ta' Istruzzjoni | biċċa 1 | biċċa 1 |
Informazzjoni dwar il-prodott
| Format | Spin kolonna | Komponent ta 'purifikazzjoni | Kolonna tal-ġene ta' qabel, reaġent |
| Fluss | 1-24 kampjun | Ħin għal kull preparazzjoni | ~30 min (24 kampjun) |
| Iċċentrifuga | Ċentrifuga fuq l-iskrivanija | Separazzjoni tal-piroliżi | Separazzjoni ċentrifugali |
| Kampjun | Tessut ta' l-annimali;ċellula | Ammont tal-kampjuni | Tessut: 10-20 mg;Ċellula: (1-5) × 106 |
| Volum ta' elużjoni | 50-200 μL | Volum massimu tat-tagħbija | 850 μL |
Karatteristiċi u vantaġġi
■ M'hemmx għalfejn tinkwieta dwar id-degradazzjoni tal-RNA;is-sistema kollha hija Ħieles mill-RNase
■ Neħħi b'mod effettiv il-Kolonna tat-Tindif tad-DNA li tuża d-DNA
■ Neħħi DNA mingħajr ma żżid DNase
■ Sempliċi-l-operazzjonijiet kollha jitlestew f'temperatura tal-kamra
■ Fast -operazzjoni tista 'titlesta fi 30 minuta
■ Safe-ebda reaġent organiku meħtieġ
■ Purità għolja -OD260/280≈1.8-2.1
Applikazzjoni tal-kit
Huwa adattat għall-estrazzjoni u l-purifikazzjoni ta 'RNA totali minn varjetà ta' tessuti ta 'annimali friski jew iffriżati jew ċelloli kkultivati.
Parametri tal-prodott
■ Applikazzjonijiet downstream: sinteżi ta 'cDNA ta' l-ewwel linja, RT-PCR, klonazzjoni molekulari, Northern Blot, eċċ.
■ Kampjuni: tessuti tal-annimali, ċelloli kkultivati
■ Dożaġġ: Tessuti 10-20mg, Cells(2-5)×106
■ Kapaċità massima tal-irbit tad-DNA tal-kolonna tal-purifikazzjoni: 80 μg
■ Volum ta 'eluzzjoni: 50-200 μl
Dijagramma
Kit ta 'Iżolament ta' RNA Totali ta 'Annimali trattat 20mg
Kampjuni friski tal-ġurdien, ħu 5% RNA totali purifikat 1% agar
Glycogel elettroforesi
1: Milsa 2: Kilwa
3: Fwied 4: Qalb
Ħażna u ħajja fuq l-ixkaffa
Il-kit jista 'jinħażen għal 24 xahar f'temperatura tal-kamra (15-25 ℃) jew 2-8 ℃ għal żmien itwal.Buffer RL1 jista 'jinħażen f'4 ℃ għal xahar wara li żżid β-mercaptoethanol (mhux obbligatorju).
Artikli ċċitati
1.JEKK:18.808:Zheng, Q., Qin, F., Luo, R., et al.Nanopartiċelli bħal Lipidi MRNA mgħobbija għal Editjar tal-Bażi tal-Fwied Permezz tal-Ottimizzazzjoni tad-Disinn Kompost Ċentrali.Adv.Funct.Mater.2021, 31, 2011068.doi:10.1002/adfm.202011068.
2.JEKK:18.187:He X, Hong W, Yang J, et al.L-apoptosi spontanja taċ-ċelloli fil-preparazzjoni terapewtika taċ-ċelloli staminali jeżerċitaw effetti immunomodulatorji permezz ta 'rilaxx ta' fosfatidilserina.Sinjal Transduct Target Ther.2021 Lulju 14;6(1):270.doi: 10.1038/s41392-021-00688-z.
3.JEKK:17.97:Dai Z, Liu H, Liao J, et al.Il-modifika tal-tRNA N7-Methylguanosine ittejjeb it-traduzzjoni tal-mRNA onkoġenika u tippromwovi l-progressjoni tal-kolangiocarcinoma intrahepatic.Ċellula Mol.2021 Lulju 29:S1097-2765(21)00555-4.doi: 10.1016/j.molcel.2021.07.003.
4.JEKK:9.225:Cao X, Shu Y, Chen Y, et al.Modifikazzjoni m6A medjata minn Mettl14 tiffaċilita r-riġenerazzjoni tal-fwied billi żżomm l-omeostażi tar-retikulu endoplasmiku.Cell Mol Gastroenterol Hepatol.2021;12(2):633-651.doi: 10.1016/j.jcmgh.2021.04.001.
RNA isoaltion kits għal sorsi oħra ta' kampjunihuma disponibbli:
Ċellula, pjanti, virali, demm, eċċ.
L-RNA ma jiġix estratt jew ir-rendimenti tal-RNA huma baxxi
Ħafna drabi jkun hemm varjetà ta 'fatturi li jaffettwaw l-effiċjenza tal-irkupru, bħal: kontenut ta' RNA tal-kampjun tat-tessut, metodu ta 'tħaddim, volum ta' elużjoni, eċċ.
1. Banju tas-silġ jew ċentrifugazzjoni krijoġenika (4 °C) saret waqt it-tħaddim.
Rakkomandazzjoni: Opera f'temperatura tal-kamra (15-25 ° C) matul il-proċess kollu, m'għandekx banju tas-silġ u ċentrifuga f'temperaturi baxxi.
2. Preservazzjoni mhux xierqa tal-kampjun jew ħin eċċessiv tal-ħażna tal-kampjun.
Rakkomandazzjoni: Aħżen il-kampjuni f'-80 °C jew iffriżar f'nitroġenu likwidu u evita l-użu ripetut ta 'friża u tinħall;ipprova uża tessut frisk jew ċelloli kkultivati għall-estrazzjoni tal-RNA.
3. Liżi tal-kampjun insuffiċjenti.
Rakkomandazzjoni: Meta t-tessut ikun omoġenizzat, kun żgur li t-tessut ikun omoġenizzat biżżejjed u li ċ-ċelloli tat-tessuti huma maqsuma biżżejjed biex jispjegaw ir-rilaxx tal-RNA.
4. L-eluwent mhux miżjud b'mod korrett.
Rakkomandazzjoni: Ikkonferma li RNase-Free ddH2O huwa miżjud qatra fin-nofs tal-membrana tal-kolonna tal-purifikazzjoni.
5. Il-volum korrett ta' etanol assolut ma ġiex miżjud ma' Buffer RL2 jew Buffer RW2.
Rakkomandazzjoni: Segwi l-istruzzjonijiet, żid il-volum korrett ta 'etanol assolut ma' Buffer RL2 u Buffer RW2 u ħawwad sew qabel tuża l-kit.
6. Id-dożaġġ tal-kampjun tat-tessut mhuwiex xieraq.
Rakkomandazzjoni: Uża 10-20 mg ta 'tessut jew (1-5) × 106ċelluli għal kull 500 μl buffer RL1, peress li l-użu eċċessiv tat-tessut jista 'jirriżulta f'estrazzjoni ta' RNA mnaqqsa.
7. Volum ta 'elużjoni mhux xieraq jew elużjoni mhux kompluta.
Rakkomandazzjoni: Il-volum ta 'eluzzjoni tal-kolonna tal-purifikazzjoni huwa 50-200 μl;jekk l-effett ta 'elużjoni ma jkunx sodisfaċenti, huwa rakkomandat li jiġi estiż il-ħin tat-tqegħid fit-temperatura tal-kamra wara li żżid ddH Ħieles minn RNase imsaħħan minn qabel2O, eż. għal 5-10 min.
8.Il-kolonna ta 'purifikazzjoni għandha residwu ta' etanol wara l-ħasil tal-Buffer RW2.
Rakkomandazzjoni: Jekk ikun hemm residwu tal-etanol wara l-ħasil tal-Buffer RW2, ċentrifugazzjoni ta 'tubu vojt għal 1min, il-ħin għall-operazzjoni ta' ċentrifugazzjoni ta 'tubu vojt jista' jiżdied għal 2min, jew il-kolonna ta 'purifikazzjoni tista' titqiegħed f'temperatura tal-kamra għal 5 min biex tneħħi b'mod adegwat l-etanol residwu.
RNA purifikat huwa degradat
Il-kwalità tal-RNA purifikat hija relatata ma 'fatturi bħall-preservazzjoni tal-kampjun, kontaminazzjoni RNase, u manipulazzjoni, eċċ.
1. Il-kampjuni tat-tessuti ma jinżammux fil-ħin.
Rakkomandazzjoni: Jekk il-kampjuni tat-tessuti jew iċ-ċelloli ma jintużawx fil-ħin wara l-ġbir, ippriserva immedjatament krijopreserva f'-80 °C jew nitroġenu likwidu.Biex tiġbed l-RNA, uża kampjun tat-tessut jew taċ-ċelluli li jkun għadu kif ttieħed kull meta jkun possibbli.
2. Iffriżar-tidwib ripetut tal-kampjuni tat-tessuti.
Rakkomandazzjoni: Meta taħżen kampjuni tat-tessuti, huwa aħjar li tnaqqashom f'biċċiet żgħar għall-preservazzjoni, u neħħi waħda mill-biċċiet meta tużahom biex tevita tidwib ripetut tal-friża tal-kampjun u d-degradazzjoni tal-RNA.
3. RNase jiġi introdott jew le liebes ingwanti, maskri, eċċ li jintremew wara l-operazzjoni.
Rakkomandazzjoni: L-esperimenti ta 'estrazzjoni ta' RNA jsiru l-aħjar fi kmamar separati ta 'manipulazzjoni ta' RNA u t-tabella titneħħa qabel l-esperiment.
Ilbes ingwanti u maskri li jintremew waqt l-esperiment biex timminimizza d-degradazzjoni tal-RNA kkawżata mill-introduzzjoni ta 'RNase.
4. Ir-reaġenti huma kkontaminati b'RNase waqt l-użu.
Rakkomandazzjoni: Ibdel b'Kit ġdid għall-Iżolament tal-RNA Totali tal-Annimali għal esperimenti relatati.
5. It-tubi taċ-ċentrifugi, il-ponot, eċċ użati fil-manipulazzjoni tal-RNA huma kkontaminati b'RNase.
Rakkomandazzjoni: Ikkonferma li t-tubi taċ-ċentrifugi, il-ponot, il-pipetti, eċċ użati fl-estrazzjoni tal-RNA huma kollha Ħieles mill-RNase.
L-RNA miksub purifikat jaffettwa l-esperimenti downstream
RNA purifikat mill-kolonna tal-purifikazzjoni, jekk il-jonji tal-melħ, il-kontenut tal-proteini huwa kbir wisq jaffettwa l-esperiment downstream, bħal: traskrizzjoni inversa,Northern Blot et al.
1. L-RNA elutionit għandu residwi tal-jone tal-melħ.
Rakkomandazzjoni: Ikkonferma li l-volum korrett ta 'etanol ġie miżjud mal-Buffer RW2 u wettaq 2 ħasliet ta' kolonna ta 'purifikazzjoni bil-veloċità ċentrifugali indikata għat-tħaddim;jekk ikun hemm xi residwu tal-jone tal-melħ, ħalli l-kolonna tal-purifikazzjoni għal Buffer RW2 għal 5 min f'temperatura tal-kamra u wettaq ċentrifugazzjoni biex timmassimizza t-tneħħija tal-kontaminazzjoni tal-melħ.
2. Residwu ta' etanol f'RNA elutionit.
Rakkomandazzjoni: Ikkonferma li wara l-ħasil tal-buffer RW2, wettaq l-operazzjoni ta 'ċentrifugazzjoni ta' tubu vojt fil-veloċità ta 'ċentrifugazzjoni indikata għall-operazzjoni, żid il-ħin tal-operazzjoni ta' ċentrifugazzjoni ta 'tubu vojt għal 2 min jekk għad hemm residwu ta' etanol, jew ħalliha f'temperatura tal-kamra għal 5 minuti wara ċ-ċentrifugazzjoni ta 'tubu vojt biex timmassimizza t-tneħħija ta' ethanol residuu.
