Kit tal-Iżolament tal-RNA Totali tal-Pjanti Kit tal-Purifikazzjoni tal-RNA Totali għall-Pjanti Baxx f'Polisakkaridi u Polifenoli
Speċifikazzjonijiet
50 Preparazzjoni, 200 Preparazzjoni
Il-kit juża l-kolonna spin u l-formula żviluppati minn Foregene, li jistgħu estratt b'mod effiċjenti RNA totali ta 'purità għolja u ta' kwalità għolja minn diversi tessuti tal-pjanti b'kontenut baxx ta 'polisakkaridi u polifenoli.Għal kampjuni ta 'pjanti b'kontenut għoli ta' polisakkaridi jew polifenoli, huwa rakkomandat li tuża Plant Total RNA Isolation Plus Kit biex tikseb riżultati aħjar ta 'estrazzjoni ta' RNA.Il-kit jipprovdi l-kolonna tat-Tindif tad-DNA li tista 'faċilment tneħħi d-DNA ġenomika mis-supernatant u l-lisat tat-tessut.Kolonna ta 'RNA biss tista' torbot l-RNA b'mod effettiv.Il-kit jista 'jipproċessa numru kbir ta' kampjuni fl-istess ħin.
Is-sistema kollha ma fiha RNase, għalhekk l-RNA purifikat mhux se jiġi degradat.Buffer PRW1 u Buffer PRW2 jistgħu jiżguraw li l-RNA miksub ma jkunx ikkontaminat minn proteini, DNA, joni, u komposti organiċi.
Komponenti tal-kit
| Buffer PSL1, Buffer PS, Buffer PSL2 |
| Buffer PRW1, Buffer PRW2 |
| Ħieles mill-RNase ddH2O, Kolonna tat-Tindif tad-DNA |
| Kolonna RNA biss |
| Istruzzjonijiet |
Karatteristiċi u vantaġġi
■ Operazzjoni f'temperatura tal-kamra (15-25℃) matul il-proċess kollu, mingħajr banju tas-silġ u ċentrifugazzjoni f'temperatura baxxa.
■ Kit komplut RNase-Free, m'hemmx għalfejn tinkwieta dwar id-degradazzjoni tal-RNA.
■ Il-Kolonna tat-Tindif tad-DNA torbot speċifikament mad-DNA, sabiex il-kit ikun jista 'jneħħi l-kontaminazzjoni tad-DNA ġenomika mingħajr ma żżid DNase.
■ Rendiment għoli ta 'RNA: Kolonna ta' RNA biss u formula unika jistgħu jippurifikaw l-RNA b'mod effiċjenti.
■ Veloċità mgħaġġla: faċli biex topera u tista 'titlesta fi żmien 30 minuta.
■ Sigurtà: l-ebda reaġent organiku mhu meħtieġ.
■ Kwalità għolja: Il-frammenti tal-RNA purifikat huma ta 'purità għolja, ħielsa minn proteini u impuritajiet oħra, u jistgħu jilħqu diversi applikazzjonijiet sperimentali downstream.
Applikazzjoni tal-kit
Huwa adattat għall-estrazzjoni u l-purifikazzjoni ta 'RNA totali minn kampjuni ta' tessut tal-pjanti friski jew iffriżati (speċjalment tessut tal-weraq tal-pjanti friski) b'kontenut baxx ta 'polisakkarid u polifenol.
Fluss tax-xogħol
Dijagramma
Plant Total RNA Isolation Kit Plus ipproċessat 50mg ta 'weraq frisk ta' polisakkaridi u polifenoli, u 5% RNA purifikat ġie ttestjat permezz ta 'elettroforeżi.
1: Banana
2: Ginkgo
3: Qoton
4: Rummien
Ħażna u ħajja fuq l-ixkaffa
Il-kit jista 'jinħażen għal 12-il xahar f'temperatura tal-kamra (15-25 ℃) f'ambjent niexef, u 2-8 ℃ għal żmien itwal (24 xahar).
Buffer PSL1 jista 'jinħażen f'4 ℃ għal xahar wara li żżid 2-hydroxy-1-ethanethiol (mhux obbligatorju).
Gwida għall-Analiżi tal-Problema
L-analiżi li ġejja tal-problemi li tista’ tiltaqa’ fihomTotal tal-PjantiRNA extraction will help you with your experiments. In addition, for other experimental or technical problems in addition to operating instructions and problem analysis, we have dedicated technical support to help you. If you have any needs, please contact us at: 028-83360257 or E-mali : Tech@foregene.com.
Il-kolonna spin hija misduda
L-imblukkar tal-kolonna spin se jikkawża li r-rendiment tal-RNA jitnaqqas jew saħansitra ma jkunx jista 'jiġi purifikat biex jikseb RNA, u l-kwalità tal-RNA miksub tkun baxxa.
Analiżi tal-Kawża Komuni:
1. Il-kampjun mhuwiex miksur kompletament.
Il-frammentazzjoni tal-kampjun mhux kompluta tista 'timblokka l-Kolonna tat-Tindif tad-DNA, li tista' wkoll taffettwa r-rendiment u l-kwalità tal-RNA.Nirrakkomandaw li meta twettaq il-frammentazzjoni tal-kampjun, itħan malajr f'ammonti suffiċjenti ta 'nitroġenu likwidu biex tkisser it-tessuti bħal ħitan taċ-ċelluli u membrani taċ-ċelluli tal-kampjuni kemm jista' jkun.Għal kampjuni ta 'pjanti ta' polyphenol polysaccharides, nirrakkomandaw li tuża Plant Total RNA Isolation Kit Plus.
2.Aspira s-supernatant iżolat tal-Kolonna tat-Tindif tad-DNA, aspira l-pellet possibbli tad-debris taċ-ċelluli.
Il-pellet ta 'debris taċ-ċelluli aspirati jista' jimblokka l-Kolonna ta 'RNA biss waqt proċeduri ta' adsorbiment ta 'RNA (ara l-pass 5 tal-proċedura, il-pass 6 tal-proċedura tal-polysaccharide polyphenol).Nirrakkomandaw li għandha tingħata attenzjoni meta jiġi aspirat dan is-supernatant biex jiġi evitat li d-debris taċ-ċelluli jiġi aspirat.
3. L-ammont inizjali tal-kampjun huwa kbir wisq.
Użu eċċessiv tal-kampjun jirriżulta fi frammentazzjoni mhux kompluta tal-kampjun jew liżi mhux kompluta taċ-ċelloli minn Buffer PRL1 jew Buffer PSL1, li jirriżulta f'kolonna ta' purifikazzjoni misduda għal operazzjonijiet ta' purifikazzjoni.Plant Total RNA Isolation Kit għandu massimu inizjali ta '50 mg għal kull purifikazzjoni waħda ta' kampjun imħaddem.Għal kampjuni ta 'pjanti ta' polyphenol polysaccharides, nirrakkomandaw li tipprova l-Plant Total RNA Isolation Kit Plus.
4. It-temperatura taċ-ċentrifuga hija baxxa wisq.
Iżolament u purifikazzjoni ta 'RNA sħiħ ħlief għal tfixkil tan-nitroġenu likwidu tat-tessut tal-kampjun, il-passi kollha jitwettqu f'temperatura tal-kamra (20-25 °C).Xi ċentrifugi b'temperatura baxxa għandhom temperaturi taħt l-20 °C, li jistgħu jikkawżaw imblukkar fil-Kolonna tat-Tindif tad-DNA u/jew Kolonna tal-RNA biss.Jekk iseħħ dan, issettja t-temperatura taċ-ċentrifuga għal 20-25 °C u saħħan minn qabel it-taħlita tal-liżi u/jew iż-żieda tas-supernatant tas-separazzjoni tal-etanol għal 37 °C.
L-ebda RNA estratt jew rendiment ta 'RNA huwa baxx
Normalment ikun hemm ħafna fatturi li jaffettwaw l-effiċjenza tal-irkupru, bħal: kontenut ta 'RNA tal-kampjun, metodu ta' tħaddim, il-volum ta 'eluzzjoni, eċċ.
Analiżi tal-kawżi komuni kif hawn taħt:
1.Twettqet ċentrifugazzjoni ta 'banju tas-silġ jew temperatura baxxa (4 ° C) matul l-operazzjoni.
Suġġeriment: Opera f'temperatura tal-kamra (15-25 ° C) fil-proċess kollu, ma tagħmilx banju tas-silġ u ċentrifugazzjoni f'temperatura baxxa.
2.L-RNA ġie degradat minħabba preservazzjoni mhux xierqa tal-kampjun jew preservazzjoni fit-tul tal-kampjun.
Rakkomandazzjoni: Kampjuni miġbura friska għandhom jiġu ffriżati malajr fin-nitroġenu likwidu, u mbagħad maħżuna f'-80 ° C għal żmien twil, evita l-iffriżar u t-tidwib ripetut tal-kampjuni;jew immedjatament xarrab il-kampjuni fis-soluzzjoni RNAlater tal-stabilizzatur tal-RNA (kampjuni tal-annimali).
3.Frammentazzjoni insuffiċjenti tal-kampjun u liżi jwasslu għall-imblukkar tal-kolonna tal-purifikazzjoni.
Suġġeriment: Meta tħin it-tessut, jekk jogħġbok kun żgur li t-tessut ikun mitħun biżżejjed, u ttrasferih malajr għall-Buffer PSL1 ippreparat minn qabel (ikkonferma li l-proporzjon korrett ta 'β-ME ġie miżjud, ara l-pass 1 tal-proċedura).
4.L-eluwent ġie miżjud b'mod żbaljat.
Suġġeriment: Kun żgur li ddH RNase-Free2O jitqattar fin-nofs tal-membrana tal-kolonna tal-purifikazzjoni.
5.Il-volum korrett ta 'etanol assolut ma ġiex miżjud ma' Buffer PSL2 jew Buffer PRW2.
Suġġeriment: Jekk jogħġbok segwi l-istruzzjonijiet, żid il-volum korrett ta 'etanol assolut ma' Buffer PSL2 u Buffer PRW2 u ħawwad sew qabel ma jintuża l-kit.
6.L-ammont ta 'kampjun tat-tessut mhuwiex xieraq.
Suġġeriment: Uża 50 mg ta 'tessut għal kull 500 μl ta' Buffer PSL1.L-użu ta 'tessut wisq inaqqas l-ammont ta' RNA estratt u l-purità tal-RNA li jirriżulta se titnaqqas ukoll.Nirrakkomandaw bil-qawwa li d-dożaġġ inizjali tal-kampjun m'għandux jaqbeż il-50 mg għal kull operazzjoni ta 'estrazzjoni ta' RNA.
7. Volum ta' elużjoni mhux xieraq jew elużjoni mhux kompluta.
Suġġeriment: Il-volum tal-eluwent tal-kolonna tal-purifikazzjoni huwa 50-200 μl;jekk l-effett ta 'elużjoni ma jkunx sodisfaċenti, huwa rakkomandat li jiġi estiż il-ħin f'temperatura tal-kamra wara li żżid ddH Ħieles minn RNase-msaħħan minn qabel2O, bħal 5-10min.
8.Il-kolonna ta 'purifikazzjoni għandha residwu ta' etanol wara l-ħasil bil-Buffer PRW2.
Suġġeriment: Jekk it-tubu vojt jiġi ċentrifugat għal 1 min u għad fadal etanol wara l-ħasil fil-Buffer PRW2, tista 'żżid il-ħin taċ-ċentrifugazzjoni tat-tubu vojt għal 2 min, jew poġġi l-kolonna tal-purifikazzjoni f'temperatura tal-kamra għal 5 min biex tneħħi kompletament l-etanol residwu.
9.Il-kit intuża ħażin.
Suġġeriment: Għal kampjuni ta 'pjanti ta' polisakkaridi polifenoliċi, bl-użu ta 'kits komuni bħal Plant Total RNA Isolation Kit jista' ma jkunx kapaċi jikseb kampjuni ideali ta 'RNA.Nirrakkomandaw li tuża Plant Total RNA IsolationKit Plus, li hija ddisinjata apposta għal kampjuni ta 'pjanti polisakkaridi polifenoliċi.Kit żviluppat apposta għall-estrazzjoni tal-RNA minn kampjuni tal-pjanti tal-polifenoli u tal-polisakkaridi.
Il-valur OD260/OD280 huwa baxx
Elużjoni tal-RNA b'ddH2O u użat għall-qari tal-ispettrofotometru jirriżulta f'valuri OD260/OD280 baxxi.Nirrakkomandaw li tuża 10 mM Tris-HCl, pH 7.5 (minflok ddH Ħieles minn RNase2O biex elute RNA) biex tikseb valuri OD260/OD280 relattivament korretti, ara “Assaġġi ta’ Konċentrazzjoni u Purifikazzjoni tal-RNA” f’paġna 19.
L-RNA purifikat huwa degradat
Il-kwalità tal-RNA purifikat hija relatata ma 'fatturi bħall-preservazzjoni tal-kampjun, il-kontaminazzjoni tal-RNase, u l-manipulazzjoni.
Analiżi tal-kawżi komuni:
1. Il-kampjuni tat-tessut ma ġewx maħżuna fil-ħin wara l-ġbir.
Rakkomandazzjoni: Jekk il-kampjuni tat-tessuti ma jintużawx fil-ħin wara l-ġbir, jekk jogħġbok aħżenhom f'nitroġenu likwidu f'temperatura baxxa immedjatament jew ittrasferihom għal -80 ° C għal ħażna fit-tul wara l-iffriżar ta 'malajr fin-nitroġenu likwidu, jew immedjatament għaddas il-kampjuni f'soluzzjoni RNAlater stabilizzatur RNA (kampjuni tal-annimali).Għall-estrazzjoni tal-RNA, ipprova uża kampjuni tat-tessut miġbura friska.
2.Ffriżar u tidwib ripetuti ta 'kampjuni tat-tessuti.
Suġġeriment: Meta taħżen kampjuni tat-tessuti, huwa aħjar li taqtgħu f'biċċiet żgħar għall-preservazzjoni, u oħroġ parti minnhom meta tużahom biex tevita d-degradazzjoni tal-RNA kkawżata minn iffriżar u tidwib ripetut tal-kampjuni.
3.RNase jiġi introdott fil-kamra tal-operazzjoni jew ingwanti li jintlibsu, maskri, eċċ.
Suġġeriment: L-esperimenti ta 'estrazzjoni ta' RNA jitwettqu l-aħjar f'operazzjonijiet ta 'RNA separati, u t-tabella tal-laboratorju għandha titnaddaf qabel l-esperiment, u ingwanti u maskri li jintremew għandhom jintlibsu matul l-esperiment biex tiġi evitata d-degradazzjoni tal-RNA ikkawżata mill-introduzzjoni ta 'RNase sa l-akbar punt.
4.Ir-reaġent huwa kkontaminat minn RNase waqt l-użu.
Suġġeriment: Ibdel b'serje ġdida ta 'kits ta' estrazzjoni ta 'RNA totali tal-pjanti għal esperimenti relatati.
5.It-tubi taċ-ċentrifugi u l-ponot tal-pipetta użati għall-manipulazzjoni tal-RNA huma kkontaminati b'RNase.
Suġġeriment: Kun żgur li t-tubi taċ-ċentrifugi, il-ponot tal-pipetta, il-pipetti, eċċ użati fl-estrazzjoni tal-RNA huma kollha Ħieles mill-RNase.
Manwali ta' Istruzzjonijiet:
Manwal tal-Istruzzjoni tal-Kit tal-Iżolament tal-RNA Totali tal-Pjanti
