Cell Direct RT qPCR Kit—Taqman Direct Cell Lysis Cell Ready Kits qRT-PCR f'pass wieħed Sonda
Deskrizzjonijiet
Dan il-prodott juża sistema unika liżi buffer biex jirrilaxxa malajr RNA minn kampjuni ta 'ċelluli kkultivati għal reazzjonijiet RT-qPCR, jelimina l-proċess ta' purifikazzjoni tal-RNA li jieħu ħafna ħin u impenjattiv, u 7 minuti biss biex jikseb il-mudell RNA meħtieġ, bil-5 × Direct RT Mix, 2 × Direct qPCR Mix-Taqman ipprovdut mill-kit jista 'jikseb riżultati PCR malajr u effiċjenti b'mod reali.
5 × Direct RT Mix u 2 × Direct qPCR Mix-Taqman għandhom tolleranza qawwija ta 'inibitur u jistgħu jwettqu treġġigħ lura effiċjenti u amplifikazzjoni speċifika bl-użu tal-lysate tal-kampjun li għandu jitkejjel bħala mudell.Ir-reaġent fih Foregene Reverse Transcriptase, Hot D-Taq DNA Polymerase, dNTPs, MgCl2, Buffer ta 'Reazzjoni, Ottimizzatur u Stabbilizzatur tal-PCR, li jistgħu jintużaw ma' buffer tal-lysis biex jiskopru malajr u faċilment kampjuni, u għandu l-karatteristiċi ta 'sensittività, speċifiċità u stabbiltà għolja.
Speċifikazzjonijiet
200×20μl Rxns, 1000×20μl Rxns
Komponenti tal-kit
| QuickEasyTMCell Direct RT-qPCR Kit-Taqman | ||||
| Komponenti tal-kit 20μl qPCR Sistema ta 'Reazzjoni | DRT-01021 | DRT-01022 | Nota | |
| 200 T | 1000 T | |||
|
Parti I | Buffer CL | 4 ml | 20 ml | Liżi taċ-Ċelloli |
| Foregene Protease Plus II | 80 μl | 400 μl | ||
| Buffer ST | 400 μl | 1 ml × 2 | ||
|
Parti II | Eraser tad-DNA | 80 μl | 400 μl | |
| 5 × Taħlita RT diretta * | 160 μl | 800 μl | RT | |
| 2× Dirett qPCR Mix-Taqman * | 1 ml × 2 | 1.7 ml × 6 | qPCR | |
| Żebgħa ta 'referenza 20 × ROX | 40 μl | 200 μl | ||
| Ħieles mill-RNase ddH2O | 1.7 ml | 10 ml | ||
| Manwal ta' Istruzzjoni | biċċa 1 | biċċa 1 | ||
*:Liżi taċ-ċelluli, 5 × Direct RT Mix, 2 × Direct qPCR Mix-Taqman jistgħu jinxtraw separatament
Karatteristiċi u vantaġġi
■Sempliċi u effettiva: bit-teknoloġija Cell Direct RT, il-kampjuni tal-RNA jistgħu jinkisbu f'7 minuti biss.
■ Id-domanda tal-kampjun hija żgħira, jistgħu jiġu ttestjati baxxi daqs 10 ċelloli.
■ Produzzjoni għolja: tista 'malajr tiskopri RNA f'ċelloli kkultivati fi pjanċi ta' 384, 96, 24, 12, 6-well.
■ DNA Eraser jista 'malajr ineħħi ġenomi rilaxxati, inaqqas ħafna l-impatt fuq riżultati sperimentali sussegwenti.
■ Is-sistema ottimizzata RT u qPCR tagħmel it-traskrizzjoni inversa RT-PCR f'żewġ stadji aktar effiċjenti u PCR aktar speċifika, u aktar reżistenti għall-inibituri tar-reazzjoni RT-qPCR.
Applikazzjoni tal-kit
Skop ta' applikazzjoni: ċelloli kkultivati.
- RNA rilaxxat b'liżi tal-kampjun: applikabbli biss għall-mudell RT-qPCR ta' dan il-kit.
- Il-kit jista 'jintuża għall-għanijiet li ġejjin: analiżi tal-espressjoni tal-ġeni, verifika tal-effett ta' sajlenser tal-ġeni medjat minn siRNA, screening tad-droga, eċċ.
Ħażna u Żmien kemm idum tajjeb
Parti I ta' dan il-kit għandha tinħażen f'4℃;Il-Parti II għandha tinħażen f'-20℃.
Foregene Protease Plus II għandu jinħażen f'4℃, tiffriżax f'-20℃.
Reaġent 2×QPCR dirett Mix-Taqman għandu jinħażen f'-20℃fid-dlam;jekk jintuża ta 'spiss, jista' wkoll jinħażen f'4℃ għal ħażna għal żmien qasir (uża fi żmien 10 ijiem).
Prinċipji tad-disinn tal-primer tal-PCR Real Time
Forward Primer u Reverse Primer
Għal Real Time PCR, id-disinn tal-primer huwa importanti ħafna.Primers huma relatati mal-ispeċifiċità u l-effiċjenza tal-amplifikazzjoni tal-PCR, u jistgħu jiġu ddisinjati b'referenza għall-prinċipji li ġejjin:
- Tul tal-primer: 18-30bp.
- Kontenut GC: 40-60%.
- Valur Tm: Softwer tad-disinn Primer, bħal Primer 5, jista 'jagħti l-valur Tm tal-primer.Il-valuri Tm tal-primers upstream u downstream għandhom ikunu qrib kemm jista' jkun.Il-formula tal-kalkolu Tm tista' tintuża wkoll: Tm = 4 °C (G + C) + 2 °C (A + T).Meta twettaq PCR, temperatura taħt il-valur Tm primer ta '5 °C ġeneralment tintgħażel bħala t-temperatura tal-ittemprar (iż-żieda korrispondenti fit-temperatura tal-ittemprar tista' żżid l-ispeċifiċità tar-reazzjoni tal-PCR).
- Primers u prodotti PCR:
- Disinn primer PCR amplifikazzjoni tul tal-prodott huwa preferibbilment 100-150bp.
- Primers tad-disinn fiż-żona strutturali sekondarja tal-mudell għandhom jiġu evitati kemm jista 'jkun.
- Evita l-formazzjoni ta’ 2 bażijiet komplementari jew aktar bejn it-truf 3′ ta’ primers upstream u downstream.
- Primer 3′ bażi terminali ma tistax tkun preżenti bi 3 G jew C konsekuttivi addizzjonali.
- Il-primers infushom ma jistgħux ikollhom strutturi komplementari, inkella se tiġi ffurmata struttura ta 'hairpin, li taffettwa l-amplifikazzjoni tal-PCR.
- ATCG għandu jitqassam bl-aktar mod uniformi possibbli fis-sekwenza tal-primer, u l-bażi terminali 3′ għandha tiġi evitata bħala T.
Appendiċi1: Cell DirettRT-qPCR Kit komponentt pakkett suppliment
1.Cell Lysis Soluzzjoni
| Soluzzjoni tal-Liżi taċ-Ċelloli | |||
| Komponenti tal-kit (sistema ta’ liżi ta’ 24-bir/bir) | DRT-01011-A1 | DRT-01011-A2 | |
| 100 T | 500 T | ||
| PartiI | Buffer CL | 20 ml | 100 ml |
| Foregene Protease Plus II | 400 μl | 1 ml × 2 | |
| Buffer ST | 1 ml × 2 | 10 ml | |
| PartiII | Eraser tad-DNA | 400 μl | 1 ml × 2 |
| RT Ħallat | |
| Komponenti tal-kit (20 μl sistema ta' reazzjoni) | DRT-01011-B1 |
| 200 T | |
| 5 × Ħallat RT Dirett | 800 μl |
| Ħieles mill-RNase ddH2O | 1.7 ml × 2 |
| QPCR Ħallat | ||
| Komponenti tal-kit (20 μl sistema ta' reazzjoni) | DRT-01021-C1 | DRT-01021-C2 |
| 200 T | 1000 T | |
| 2× Dirett qPCR Mix-Taqman | 1 ml × 2 | 1.7 ml × 6 |
| 20 × Żebgħa ta 'Referenza ROX | 40 μl | 200 μl |
| Ħieles mill-RNase ddH2O | 1.7 ml | 10 ml |
Manwali ta' Istruzzjonijiet:
