(96-well) QuickEasy Cell Direct RT-qPCR Kit - SYBR Green I
Deskrizzjonijiet
Il-(96-tajjeb) QuickEasyTM Cell Direct RT-qPCR Kit–SYBR Aħdar Ijipprovdisistema unika liżi bufferto rilaxx malajr RNAminn ċellula kkultivatakampjuni għal reazzjonijiet RT-qPCR, li jeliminaw il-ħin u impenjattivProċess ta 'purifikazzjoni tal-RNA, u jieħu biss 7 minuti biex jikseb il-mudell tal-RNA meħtieġ.Il-5 × Ħallat RT Direttu2 × Dirett qPCR Mix-SYBRipprovdut fil-kaxxa jista malajr ueffettivament jiksbu kwantitattivi f'ħin realiRiżultati tal-PCR.
5 × Direct RT Mix u 2 × Direct qPCR Mix-SYBR għandhom tolleranza qawwija ta 'inibitur, u jistgħu jużaw il-lysate tal-kampjun li għandu jiġi ttestjat bħala mudell għal traskrizzjoni b'lura effiċjenti u amplifikazzjoni speċifika.Ir-reaġent fih Foregene Reverse Transcriptase uniku b'affinità għolja għall-RNA, kif ukoll Hot D-Taq DNA Polymerase, dNTPs, MgCl2 , buffer ta 'reazzjoni, PCR optimizer u stabilizzatur , u jista' jintuża flimkien mal-lysis buffer biex jiskopri l-kampjun malajr, faċilment u b'mod preċiż, u għandu l-karatteristiċi ta 'sensittività għolja, speċifiċità qawwija u stabbiltà tajba.
Il-kit huwa mmirat lejn il-liżi tal-mikro-sistema ta 'ċelluli kkultivati tajjeb 96, u għandu uniformità u konsistenza tajba;il-komponenti tal-kit jipprovdu 96 reazzjoni ta 'liżi, 96 reazzjoni ta' traskrizzjoni inversa u 96 × 2 reazzjonijiet qPCR, li jistgħu jilħqu l-pjanċa taċ-ċelloli 96-well għal użu ta 'darba, jevitaw it-tniġġis ikkawżat minn ftuħ ripetut, iffriżar u tidwib ta' reaġenti u d-degradazzjoni tal-prestazzjoni tar-reaġent.
Komponenti tal-kit
| Kompożizzjoni tal-kit ( 50 μSistema tal-liżi L/20 μLRT sistema ta' reazzjoni /20μL sistema ta' reazzjoni qPCR) | DRT-03011 | Rimarka | |
| 96T | |||
| PartiI | BufferCL | 5 mL | ĊellulaLiżi |
| ForegeneProtease Plus II | 100 μL | ||
| BufferST | 500 μL | ||
| Parti II | DNAEraser | 100 μL | |
| 5 × Ħallat RT Dirett | 400 μL | RT | |
| 2 × Taħlita diretta tal-qPCR-SYBR | 1 mL × 2 | qPCR | |
| 50 × Żebgħa ta 'Referenza ROX | 400µL | ||
| RNase- B'xejnddH2 O | 1.7mL |
| |
| Mannwali | 1 biċċa | 1 porzjon | |
*: Ir-reaġent tal-liżi DNA Eraser huwa inkluż fil-Parti II tal-kit;Il-komponenti tal-Liżi taċ-Ċelloli, RT, u qPCR jistgħu jinxtraw separatament.
Karatteristiċi u vantaġġi
■Sempliċi u effettiva: bit-teknoloġija Cell Direct RT, il-kampjuni tal-RNA jistgħu jinkisbu f'7 minuti biss.
■ Id-domanda tal-kampjun hija żgħira, jistgħu jiġu ttestjati baxxi daqs 10 ċelloli.
■ Produzzjoni għolja: tista 'malajr tiskopri RNA f'ċelloli kkultivati fi pjanċi ta' 384, 96, 24, 12, 6-well.
■ DNA Eraser jista 'malajr ineħħi ġenomi rilaxxati, inaqqas ħafna l-impatt fuq riżultati sperimentali sussegwenti.
■ Is-sistema ottimizzata RT u qPCR tagħmel it-traskrizzjoni inversa RT-PCR f'żewġ stadji aktar effiċjenti u PCR aktar speċifika, u aktar reżistenti għall-inibituri tar-reazzjoni RT-qPCR.
Applikazzjoni tal-kit
Skop ta' applikazzjoni: ċelloli kkultivati.
- RNA rilaxxat b'liżi tal-kampjun: applikabbli biss għall-mudell RT-qPCR ta' dan il-kit.
- Il-kit jista 'jintuża għall-għanijiet li ġejjin: analiżi tal-espressjoni tal-ġeni, verifika tal-effett ta' sajlenser tal-ġeni medjat minn siRNA, screening tad-droga, eċċ.
Ħażna u Żmien kemm idum tajjeb
Parti I ta' dan il-kit għandha tinħażen f'4℃;Il-Parti II għandha tinħażen f'-20℃.
Foregene Protease Plus II għandu jinħażen f'4℃, tiffriżax f'-20℃.
Reaġent 2×QPCR dirett Mix-Taqman għandu jinħażen f'-20℃fid-dlam;jekk jintuża ta 'spiss, jista' wkoll jinħażen f'4℃ għal ħażna għal żmien qasir (uża fi żmien 10 ijiem).
Prinċipji tad-disinn tal-primer tal-PCR Real Time
Forward Primer u Reverse Primer
Għal Real Time PCR, id-disinn tal-primer huwa importanti ħafna.Primers huma relatati mal-ispeċifiċità u l-effiċjenza tal-amplifikazzjoni tal-PCR, u jistgħu jiġu ddisinjati b'referenza għall-prinċipji li ġejjin:
- Tul tal-primer: 18-30bp.
- Kontenut GC: 40-60%.
- Valur Tm: Softwer tad-disinn Primer, bħal Primer 5, jista 'jagħti l-valur Tm tal-primer.Il-valuri Tm tal-primers upstream u downstream għandhom ikunu qrib kemm jista' jkun.Il-formula tal-kalkolu Tm tista' tintuża wkoll: Tm = 4 °C (G + C) + 2 °C (A + T).Meta twettaq PCR, temperatura taħt il-valur Tm primer ta '5 °C ġeneralment tintgħażel bħala t-temperatura tal-ittemprar (iż-żieda korrispondenti fit-temperatura tal-ittemprar tista' żżid l-ispeċifiċità tar-reazzjoni tal-PCR).
- Primers u prodotti PCR:
- Disinn primer PCR amplifikazzjoni tul tal-prodott huwa preferibbilment 100-150bp.
- Primers tad-disinn fiż-żona strutturali sekondarja tal-mudell għandhom jiġu evitati kemm jista 'jkun.
- Evita l-formazzjoni ta’ 2 bażijiet komplementari jew aktar bejn it-truf 3′ ta’ primers upstream u downstream.
- Primer 3′ bażi terminali ma tistax tkun preżenti bi 3 G jew C konsekuttivi addizzjonali.
- Il-primers infushom ma jistgħux ikollhom strutturi komplementari, inkella se tiġi ffurmata struttura ta 'hairpin, li taffettwa l-amplifikazzjoni tal-PCR.
- ATCG għandu jitqassam bl-aktar mod uniformi possibbli fis-sekwenza tal-primer, u l-bażi terminali 3′ għandha tiġi evitata bħala T.
Appendiċi1: Cell DirettRT-qPCR Kit komponentt pakkett suppliment
1.Cell Lysis Soluzzjoni
| Soluzzjoni tal-Liżi taċ-Ċelloli | |||
| Komponenti tal-kit (sistema ta’ liżi ta’ 24-bir/bir) | DRT-01011-A1 | DRT-01011-A2 | |
| 100 T | 500 T | ||
| PartiI | Buffer CL | 20 ml | 100 ml |
| Foregene Protease Plus II | 400 μl | 1 ml × 2 | |
| Buffer ST | 1 ml × 2 | 10 ml | |
| PartiII | Eraser tad-DNA | 400 μl | 1 ml × 2 |
| RT Ħallat | |
| Komponenti tal-kit (20 μl sistema ta' reazzjoni) | DRT-01011-B1 |
| 200 T | |
| 5 × Ħallat RT Dirett | 800 μl |
| Ħieles mill-RNase ddH2O | 1.7 ml × 2 |
| QPCR Ħallat | ||
| Komponenti tal-kit (20 μl sistema ta' reazzjoni) | DRT-01021-C1 | DRT-01021-C2 |
| 200 T | 1000 T | |
| 2× Dirett qPCR Mix-Taqman | 1 ml × 2 | 1.7 ml × 6 |
| 20 × Żebgħa ta 'Referenza ROX | 40 μl | 200 μl |
| Ħieles mill-RNase ddH2O | 1.7 ml | 10 ml |
Manwali ta' Istruzzjonijiet:
