Kit tal-Iżolament tal-RNA Totali tal-Pjanti Plus Kit tal-Purifikazzjoni tal-RNA Totali għall-Pjanti Sinjuri f'Polisakkaridi u Polifenoli
Deskrizzjoni tal-Kit:
Cat.Nru.RE-05021/05022/05024
Għall-purifikazzjoni tal-RNA totali minn kampjuni ġenerali tal-pjanti li fihom komponenti għolja ta' polysaccharide u polyphenol.
Estratt malajr RNA totali ta 'kwalità għolja minn kampjuni tal-pjanti b'kontenut għoli ta' polisakkaridi u polifenoli.
Ħieles mill-RNase bl-użu tal-Kolonna tat-Tindif tad-DNA
Sempliċi—l-operazzjonijiet kollha jitlestew f'temperatura tal-kamra
Fast-operazzjoni tista 'titlesta fi 30 minuta
Sikur - l-ebda reaġent organiku użat 
Speċifikazzjonijiet
50 Preparazzjoni, 200 Preparazzjoni
Il-kit juża l-kolonna spin u l-formula żviluppati minn Foregene, li jistgħu estratt b'mod effiċjenti RNA totali ta 'purità għolja u ta' kwalità għolja minn diversi tessuti tal-pjanti b'kontenut għoli ta 'polisakkaridi jew polifenoli.Jipprovdi l-kolonna tat-Tindif tad-DNA li tista 'faċilment tneħħi d-DNA ġenomika mis-supernatant u l-lisat tat-tessut.Kolonna ta 'RNA biss tista' torbot l-RNA b'mod effettiv.Il-kit jista 'jipproċessa numru kbir ta' kampjuni fl-istess ħin.
Is-sistema kollha ma fiha RNase, għalhekk l-RNA purifikat mhux se jiġi degradat.Buffer PRW1 u Buffer PRW2 jistgħu jiżguraw li l-RNA miksub ma jkunx ikkontaminat minn proteini, DNA, joni, u komposti organiċi.
Komponenti tal-kit
| Buffer PSL1, Buffer PS, Buffer PSL2 |
| Buffer PRW1, Buffer PRW2 |
| Ħieles mill-RNase ddH2O, Kolonna tat-Tindif tad-DNA |
| Kolonna RNA biss |
Karatteristiċi u vantaġġi
■ Operazzjoni f'temperatura tal-kamra (15-25℃) matul il-proċess kollu, mingħajr banju tas-silġ u ċentrifugazzjoni f'temperatura baxxa.
■ Kit komplut RNase-Free, m'hemmx għalfejn tinkwieta dwar id-degradazzjoni tal-RNA.
■ Partikolarment adattat għall-purifikazzjoni ta 'RNA minn kampjuni ta' pjanti ta 'polisakkaridi u polifenoli.
■ Il-Kolonna tat-Tindif tad-DNA torbot speċifikament mad-DNA, sabiex il-kit ikun jista 'jneħħi l-kontaminazzjoni tad-DNA ġenomika mingħajr ma żżid DNase.
■ Rendiment għoli ta 'RNA: Kolonna ta' RNA biss u formula unika jistgħu jippurifikaw l-RNA b'mod effiċjenti.
■ Veloċità mgħaġġla: faċli biex topera u tista 'titlesta fi żmien 30 minuta.
■ Sigurtà: l-ebda reaġent organiku mhu meħtieġ.
■ Kwalità għolja: Il-frammenti tal-RNA purifikat huma ta 'purità għolja, ħielsa minn proteini u impuritajiet oħra, u jistgħu jilħqu diversi applikazzjonijiet sperimentali downstream.
Parametri tal-prodott
■ Applikazzjonijiet downstream: sinteżi ta 'cDNA ta' l-ewwel linja, RT-PCR, klonazzjoni molekulari, Northern Blot, eċċ.
■ Kampjun: Tessuti tal-pjanti friski jew iffriżati ta 'polisakkaridi u polifenoli
■ Dożaġġ: 50mg tessut tal-pjanti
■ Kapaċità massima tal-irbit tal-RNA tal-kolonna tal-purifikazzjoni: 80 μg
■ Volum ta 'eluzzjoni: 50-200 μl
Applikazzjoni tal-kit
Huwa adattat għall-estrazzjoni u l-purifikazzjoni ta 'RNA totali minn kampjuni ta' tessut tal-pjanti friski jew iffriżati (speċjalment tessut tal-weraq tal-pjanti friski) b'kontenut għoli ta 'polisakkarid u polifenol.
Fluss tax-xogħol
Dijagramma
Plant Total RNA Isolation Kit Plus ipproċessat 50mg ta 'weraq frisk ta' polisakkaridi u polifenoli, u 5% RNA purifikat ġie ttestjat permezz ta 'elettroforeżi.
1: Banana
2: Ginkgo
3: Qoton
4: Rummien
Ħażna u Żmien kemm idum tajjeb
Dan il-kit jista 'jinħażen għal 24 xahar taħt kundizzjonijiet niexfa f'temperatura tal-kamra (15-25 ℃);jekk jeħtieġ li jinħażen għal żmien itwal, jista 'jinħażen f'2-8℃.
Buffer PSL1 jista 'jitqiegħed f'4℃ għal xahar wara li żżid β-mercaptoethanol (huwa rakkomandat li żżidha fl-istess ħin ta' l-esperiment).
Il-kolonna pplaggjat
Wara li l-kolonna pplaggjata, ir-rendiment tal-RNA huwa mnaqqas jew saħansitra impossibbli li jiġi purifikat l-RNA, u l-massa tal-RNA miksuba hija baxxa.
Analiżi tal-kawża komuni:
1. Pawżi tal-kampjuni mhumiex bir-reqqa.
Il-ksur tal-kampjun ma jikkawżax kompletament l-imblukkar tal-KOLONNA tat-TINDIF tad-DNA, filwaqt li taffettwa r-rendiment u l-kwalità tal-RNA.Nirrakkomandaw operazzjoni rapida tat-tħin f'nitroġenu likwidu suffiċjenti meta kissret il-kampjuni, Ipprova tfarrak il-ħajt taċ-ċellula tal-kampjun, il-membrana taċ-ċellula u tessut ieħor.Għal kampjuni ta 'pjanti ta' polyol polysaccharides, nirrakkomandaw li tuża Plant Total RNA ISOLATION KIT PLUS.
2. Meta tiġbed is-supernatant tal-kampjun separat bil-Kolonna tat-Tindif tad-DNA, il-preċipitat frammentat taċ-ċellula possibbli jista' jittieħed man-nifs.
Is-sedimenti frammentati taċ-ċelluli meħuda se jikkawżaw il-Kolonna RNA BISS li tkun imblukkata meta titwettaq l-operazzjoni ta 'adsorbiment ta' RNA (ara l-pass 6).Nirrakkomandawlek bir-reqqa meta tiġbed dan is-supernatant biex tevita li d-debris taċ-ċelluli jiġi miġbud.
3. L-ammont inizjali tal-kampjun huwa wisq.
Użu eċċessiv tal-kampjun jirriżulta fi frammentazzjoni mhux kompluta tal-kampjun jew liżi taċ-ċelluli mhux kompluta minn Buffer PSL1, li jirriżulta fl-imblukkar tal-kolonna tal-purifikazzjoni waqt il-purifikazzjoni.Kit tal-Iżolament tal-RNA Totali tal-Pjanti Kull kampjun operattiv ippurifikat huwa 50 mg.Għal kampjuni ta 'pjanti ta' polyol polysaccharides, nirrakkomandaw li tipprova Plant Total RNA ISOLATION KIT PLUS.
4. It-temperatura taċ-ċentrifuga hija baxxa wisq.
Il-proċess kollu ta 'iżolament u purifikazzjoni tal-RNA jitwettaq f'temperatura tal-kamra (20-25°C), ħlief li t-tessut tal-kampjun huwa miksur minn nitroġenu likwidu. It-temperatura ta 'xi ċentrifugi krijoġeniċi hija inqas minn 20℃, li jista' jikkawża l-imblukkar tal-Kolonna tat-Tindif tad-DNA u/jew tal-Kolonna tal-RNA biss.Jekk jiġri dan, issettja t-temperatura taċ-ċentrifuga għal 20-25℃, ukun żgur li t-taħlita tal-liżi u/jew is-supernatant miżjud bl-etanol kien imsaħħan minn qabel għal 37°C.
L-ebda RNA estratt jew rendiment ta 'RNA huwa baxx
Normalment ikun hemm ħafna fatturi li jaffettwaw l-effiċjenza tal-irkupru, bħal: kontenut ta 'RNA tal-kampjun, metodu ta' tħaddim, il-volum ta 'eluzzjoni, eċċ.
Analiżi tal-kawżi komuni kif hawn taħt:
1.Twettqet ċentrifugazzjoni ta 'banju tas-silġ jew temperatura baxxa (4 ° C) matul l-operazzjoni.
Suġġeriment: Opera f'temperatura tal-kamra (15-25°C) fil-proċess kollu, ma tagħmilx banju tas-silġ u ċentrifugazzjoni f'temperatura baxxa.
2.L-RNA ġie degradat minħabba preservazzjoni mhux xierqa tal-kampjun jew preservazzjoni fit-tul tal-kampjun.
Rakkomandazzjoni: Kampjuni miġbura friska għandhom jiġu ffriżati malajr fin-nitroġenu likwidu, u mbagħad maħżuna f'-80 ° C għal żmien twil, evita l-iffriżar u t-tidwib ripetut tal-kampjuni;jew immedjatament xarrab il-kampjuni fis-soluzzjoni RNAlater tal-stabilizzatur tal-RNA (kampjuni tal-annimali).
3.Frammentazzjoni u liżi tal-kampjun insuffiċjenti jwasslu għall-imblukkar tal-kolonna tal-purifikazzjoni.
Suġġeriment: Meta tħin it-tessut, jekk jogħġbok kun żgur li t-tessut ikun mitħun biżżejjed, u ttrasferih malajr għall-Buffer PSL1 ippreparat minn qabel (ikkonferma li l-proporzjon korrett ta 'β-ME ġie miżjud, ara l-pass 1 tal-proċedura).
4.L-eluwent ġie miżjud b'mod żbaljat.
Suġġeriment: Kun żgur li ddH2O RNase-Free jitqattar fin-nofs tal-membrana tal-kolonna tal-purifikazzjoni.
5.Il-volum korrett ta 'etanol assolut ma ġiex miżjud ma' Buffer PSL2 jew Buffer PRW2.
Suġġeriment: Jekk jogħġbok segwi l-istruzzjonijiet, żid il-volum korrett ta 'etanol assolut ma' Buffer PSL2 u Buffer PRW2 u ħawwad sew qabel ma jintuża l-kit.
6.L-ammont ta 'kampjun tat-tessut mhuwiex xieraq.
Suġġeriment: Uża 50 mg ta 'tessut għal kull 500 μl ta' Buffer PSL1.L-użu ta 'tessut wisq inaqqas l-ammont ta' RNA estratt u l-purità tal-RNA li jirriżulta se titnaqqas ukoll.Nirrakkomandaw bil-qawwa li d-dożaġġ inizjali tal-kampjun m'għandux jaqbeż il-50 mg għal kull operazzjoni ta 'estrazzjoni ta' RNA.
7.Volum ta' elużjoni mhux xieraq jew elużjoni mhux kompluta.
Suġġeriment: Il-volum tal-eluwent tal-kolonna tal-purifikazzjoni huwa 50-200 μl;jekk l-effett ta 'elużjoni ma jkunx sodisfaċenti, huwa rakkomandat li jiġi estiż il-ħin f'temperatura tal-kamra wara li żżid ddH2O RNase-Free imsaħħan minn qabel, bħal 5-10min.
8.Il-kolonna ta 'purifikazzjoni għandha residwu ta' etanol wara l-ħasil b'BufferPRW2.
Suġġeriment: Jekk it-tubu vojt jiġi ċentrifugat għal 1 min u għad fadal etanol wara l-ħasil fil-Buffer PRW2, tista 'żżid il-ħin taċ-ċentrifugazzjoni tat-tubu vojt għal 2 min, jew poġġi l-kolonna tal-purifikazzjoni f'temperatura tal-kamra għal 5 min biex tneħħi kompletament l-etanol residwu.
9.Il-kit intuża ħażin.
Suġġeriment: Għal kampjuni ta 'pjanti ta' polisakkaridi polifenoliċi, bl-użu ta 'kits komuni bħal Plant Total RNA Isolation Kit jista' ma jkunx kapaċi jikseb kampjuni ideali ta 'RNA.Nirrakkomandaw li tuża Plant Total RNA IsolationKit Plus, li hija ddisinjata apposta għal kampjuni ta 'pjanti polisakkaridi polifenoliċi.Kit żviluppat apposta għall-estrazzjoni tal-RNA minn kampjuni tal-pjanti tal-polifenoli u tal-polisakkaridi.
Il-valur OD260/OD280 huwa baxx
L-eluzzjoni tal-RNA b'ddH2O u użata għall-qari tal-ispettrofotometru jirriżulta f'valuri baxxi ta' OD260/OD280.Nirrakkomandaw li tuża 10 mM Tris-HCl, pH 7.5 (minflok ddH2O Ħieles minn RNase biex elute RNA) biex tikseb valuri OD260/OD280 relattivament korretti, ara “Analiżi ta’ Konċentrazzjoni u Purifikazzjoni tal-RNA” f’paġna 19.
L-RNA purifikat huwa degradat
Il-kwalità tal-RNA purifikat hija relatata ma 'fatturi bħall-preservazzjoni tal-kampjun, il-kontaminazzjoni tal-RNase, u l-manipulazzjoni.
Analiżi tal-kawżi komuni:
1. Il-kampjuni tat-tessut ma ġewx maħżuna fil-ħin wara l-ġbir.
Rakkomandazzjoni: Jekk il-kampjuni tat-tessuti ma jintużawx fil-ħin wara l-ġbir, jekk jogħġbok aħżenhom f'nitroġenu likwidu f'temperatura baxxa immedjatament jew ittrasferihom għal -80 ° C għal ħażna fit-tul wara l-iffriżar ta 'malajr fin-nitroġenu likwidu, jew immedjatament għaddas il-kampjuni f'soluzzjoni RNAlater stabilizzatur RNA (kampjuni tal-annimali).Għall-estrazzjoni tal-RNA, ipprova uża kampjuni tat-tessut miġbura friska.
2.Ffriżar u tidwib ripetuti ta 'kampjuni tat-tessuti.
Suġġeriment: Meta taħżen kampjuni tat-tessuti, huwa aħjar li taqtgħu f'biċċiet żgħar għall-preservazzjoni, u oħroġ parti minnhom meta tużahom biex tevita d-degradazzjoni tal-RNA kkawżata minn iffriżar u tidwib ripetut tal-kampjuni.
3.RNase jiġi introdott fil-kamra tal-operazzjoni jew ingwanti li jintlibsu, maskri, eċċ.
Suġġeriment: L-esperimenti ta 'estrazzjoni ta' RNA jitwettqu l-aħjar f'operazzjonijiet ta 'RNA separati, u t-tabella tal-laboratorju għandha titnaddaf qabel l-esperiment, u ingwanti u maskri li jintremew għandhom jintlibsu matul l-esperiment biex tiġi evitata d-degradazzjoni tal-RNA ikkawżata mill-introduzzjoni ta 'RNase sa l-akbar punt.
4.Ir-reaġent huwa kkontaminat minn RNase waqt l-użu.
Suġġeriment: Ibdel b'serje ġdida ta 'kits ta' estrazzjoni ta 'RNA totali tal-pjanti għal esperimenti relatati.
5.It-tubi taċ-ċentrifugi u l-ponot tal-pipetta użati għall-manipulazzjoni tal-RNA huma kkontaminati b'RNase.
Suġġeriment: Kun żgur li t-tubi taċ-ċentrifugi, il-ponot tal-pipetta, il-pipetti, eċċ użati fl-estrazzjoni tal-RNA huma kollha Ħieles mill-RNase.
Manwali ta' Istruzzjonijiet:
Pjanti Total RNA Isolation Kit Plus Manwal ta 'Istruzzjoni
