Ġejna manifattur b'esperjenza.Jirbħu l-maġġoranza fiċ-ċertifikazzjonijiet kruċjali tas-suq tagħha għal Big skont iċ-Ċina Sensittività Għolja One-Step Probe Rt-QpcrKit V2, Il-kwalità hija l-ħajja tal-fabbrika, Iffoka fuq id-domanda tal-klijent hija s-sors tas-sopravivenza u l-iżvilupp tal-kumpanija, Aħna nżommu mal-onestà u l-attitudni tax-xogħol ta 'bona fede, ħerqana li ġejja tiegħek!
Ġejna manifattur b'esperjenza.Nirbħu l-maġġoranza fiċ-ċertifikazzjonijiet kruċjali tas-suq tagħha għalĊina Taq DNA Polymerase, Qpcr, Il-kumpanija tagħna twiegħed: prezzijiet raġonevoli, ħin qasir ta 'produzzjoni u servizz ta' wara l-bejgħ sodisfaċenti, aħna nilqgħu wkoll iżżur il-fabbrika tagħna fi kwalunkwe ħin li trid.Jixtiequ issa għandna negozju pjaċevoli u fit-tul flimkien!!!

Deskrizzjonijiet

Dan il-kit juża sistema unika tal-liżi buffer li tista 'malajr tirrilaxxa RNA minn kampjuni ta' ċelluli kkultivati ​​għal reazzjonijiet RT-qPCR, u b'hekk telimina l-proċess ta 'purifikazzjoni tal-RNA li jieħu ħafna ħin u impenjattiv.Il-mudell RNA jista 'jinkiseb f'7 minuti biss.Ir-reaġenti 5×Direct RT Mix u 2×Direct qPCR Mix-SYBR ipprovduti mill-kit jistgħu jiksbu malajr u b'mod effettiv riżultati PCR kwantitattivi f'ħin reali.

5 × Direct RT Mix u 2 × Direct qPCR Mix-SYBR għandhom tolleranza qawwija ta 'inibitur, u l-lysate tal-kampjuni jista' jintuża bħala l-mudell għal RT-qPCR direttament.Dan il-kit fih l-RNA uniku ta 'affinità għolja Foregene reverse transcriptase, u Hot D-Taq DNA polymerase, dNTPs, MgCl₂, buffer tar-reazzjoni, PCR optimizer u stabilizzatur.

Speċifikazzjonijiet

200×20μl Rxns, 1000×20μl Rxns

Komponenti tal-kit

Karatteristiċi u vantaġġi

■ Sempliċi u effettiva: bit-teknoloġija Cell Direct RT, kampjuni ta 'RNA jistgħu jinkisbu f'7 minuti biss.

■ Id-domanda tal-kampjun hija żgħira, jistgħu jiġu ttestjati baxxi daqs 10 ċelloli.

■ Produzzjoni għolja: tista 'malajr tiskopri RNA f'ċelloli kkultivati ​​fi pjanċi ta' 384, 96, 24, 12, 6-well.

■ DNA Eraser jista 'malajr ineħħi ġenomi rilaxxati, inaqqas ħafna l-impatt fuq riżultati sperimentali sussegwenti.

■ Is-sistema ottimizzata RT u qPCR tagħmel it-traskrizzjoni inversa RT-PCR f'żewġ stadji aktar effiċjenti u PCR aktar speċifika, u aktar reżistenti għall-inibituri tar-reazzjoni RT-qPCR.

Applikazzjoni tal-kit

Skop ta' applikazzjoni: ċelloli kkultivati.

- RNA rilaxxat b'liżi tal-kampjun: applikabbli biss għall-mudell RT-qPCR ta' dan il-kit.

- Il-kit jista 'jintuża għall-għanijiet li ġejjin: analiżi tal-espressjoni tal-ġeni, verifika tal-effett ta' sajlenser tal-ġeni medjat minn siRNA, screening tad-droga, eċċ.

Dijagramma

Ħażna u Żmien kemm idum tajjeb

Parti I ta 'dan il-kit għandha tinħażen f'4℃;Il-Parti II għandha tinħażen f'-20℃.

Foregene Protease Plus II għandu jinħażen f'4℃, ma jiffriżax f'-20℃.

Reaġent 2×Direct qPCR Mix-SYBR għandu jinħażen f'-20℃ fid-dlam;jekk tintuża ta 'spiss, tista' wkoll tinħażen f'4℃ għal ħażna għal żmien qasir (uża fi żmien 10 ijiem). Aħna ġejna manifattur b'esperjenza.Nirbħu l-maġġoranza fiċ-ċertifikazzjonijiet kruċjali tas-suq tagħha għal Big skont iċ-Ċina Sensittività Għolja One-Step Probe Rt-Qpcr Kit V2, Il-kwalità hija l-ħajja tal-fabbrika, Iffoka fuq id-domanda tal-klijent hija s-sors tas-sopravivenza u l-iżvilupp tal-kumpanija, Aħna nżommu mal-onestà u l-attitudni tax-xogħol ta 'bona fede, ħerqana li ġejja tiegħek!
Skontijiet kbarĊina Taq DNA Polymerase, Qpcr, Il-kumpanija tagħna twiegħed: prezzijiet raġonevoli, ħin qasir ta 'produzzjoni u servizz ta' wara l-bejgħ sodisfaċenti, aħna nilqgħu wkoll iżżur il-fabbrika tagħna fi kwalunkwe ħin li trid.Jixtiequ issa għandna negozju pjaċevoli u fit-tul flimkien!!!

QuickEasyTM Cell Direct RT-qPCR Kit -Taqman

Cat.Nru.DRT-01021/01022

Għal RT-qPCR dirett taċ-ċelluli bl-użu ta '≤ 1000,000 ċellula

Introduzzjoni tal-prodott

Dan il-prodott juża sistema unika liżi buffer biex jirrilaxxa malajr RNA minn kampjuni ta 'ċelluli kkultivati ​​għal reazzjonijiet RT-qPCR, jelimina l-proċess ta' purifikazzjoni tal-RNA li jieħu ħafna ħin u impenjattiv, u 7 minuti biss biex jikseb il-mudell RNA meħtieġ, bil-5 × Direct RT Mix, 2 × Direct qPCR Mix-Taqman ipprovdut mill-kit jista 'jikseb riżultati PCR malajr u effiċjenti b'mod reali.

5 × Direct RT Mix u 2 × Direct qPCR Mix-Taqman għandhom tolleranza qawwija ta 'inibitur u jistgħu jwettqu treġġigħ lura effiċjenti u amplifikazzjoni speċifika bl-użu tal-lysate tal-kampjun li għandu jitkejjel bħala mudell.Ir-reaġent fih Foregene Reverse Transcriptase, Hot D-Taq DNA Polymerase, dNTPs, MgCl₂, Buffer ta 'Reazzjoni, Ottimizzatur u Stabbilizzatur tal-PCR, li jistgħu jintużaw ma' buffer tal-lysis biex jiskopru malajr u faċilment kampjuni, u għandu l-karatteristiċi ta 'sensittività, speċifiċità u stabbiltà għolja.

Karatteristiċi tal-prodott

Teknoloġija Cell Direct RT sempliċi u effettiva li tieħu mill-inqas 7 minuti biex tikseb kampjuni tal-RNA.

Ir-rekwiżiti tal-kampjuni huma żgħar, u minimu ta '10 ċelluli kkultivati ​​jistgħu jintużaw għall-esperimentazzjoni.

Throughput għoli għall-akkwist rapidu ta 'RNA ta' ċelloli kkultivati ​​bħal pjanċi ta '384, 96, 24, 12, u 6-well.

DNA Eraser huwa kapaċi jneħħi malajr il-ġenomi rilaxxati, u jnaqqas ħafna l-impatt fuq riżultati sperimentali sussegwenti.

Sistemi ottimizzati RT u qPCR jippermettu RT-PCR f'żewġ stadji b'traskrizzjoni inversa aktar effiċjenti, speċifiċità, u tolleranza ta 'inibitur tar-reazzjoni RT-qPCR aktar b'saħħitha.

Applikazzjoni tal-kit

Skop ta' applikazzjoni: Ċelloli kkultivati.

Liżi tal-kampjun interpretat RNA: użat biss bħala mudell RT-qPCR f'żewġ stadji.

Il-kits jistgħu jintużaw għall-għanijiet li ġejjin: analiżi tal-espressjoni regolatorja tal-ġeni, ittestjar tal-alleli, screening tad-droga, eċċ.

Limitazzjonijiet tal-kit

Frammenti amplifikati ≤ 300 bp.

Kitts jintużaw biex jikkultivaw ċelluli friski.

Kontroll tal-kwalità tal-prodott

Skont is-Sistema ta 'Ġestjoni tal-Kwalità Totali ta' FOREGENE, kull lott ta 'kits tas-serje Cell Direct RT-qPCR jiġi ttestjat b'mod rigoruż diversi drabi biex jiżgura l-affidabbiltà u l-istabbiltà tal-kwalità ta' kull lott ta 'kits.

Kontenut tal-kit

*:Cell Lysis, 5 × Direct RT Mix, 2 × Direct qPCR Mix-Taqman jistgħu jinxtraw separatament, id-dettalji huma pprovduti fl-Appendiċi 1 (PAĠNA 13).

Kundizzjonijiet tal-ħażna

1. Kundizzjonijiet tat-Tbaħħir

Il-proċess kollu tat-trasport tal-kaxxa tas-silġ f'temperatura baxxa, biex jiġi żgurat li l-kit ikun fl-istat <4 °C.

2. Kundizzjonijiet tal-ħażna

Aħżen il-parti I f'4°C u l-Parti II f'-20°C.

Il-Foregene Protease Plus II għandu jinħażen f'4°C, mhux iffriżat f'-20°C.

Reaġent 2 × Direct qPCR Mix-Taqman jinħażen f'-20 °C, jew f'4 °C għal użu għal żmien qasir jekk jintuża ta 'spiss (fi żmien 10 ijiem).

Informazzjoni tal-komponent tal-kit

Buffer CL: Jipprovdi l-ambjent meħtieġ għar-reazzjonijiet tal-liżi taċ-ċelluli.

Buffer ST: Jittemm is-sustanza attiva fil-lisat biex jiġu evitati effetti fuq RT sussegwenti.

DNA Eraser: DNA remover, l-effett tat-tneħħija tal-ġenoma fuq esperimenti sussegwenti.

5 × Direct RT Mix: Fih Foregene Reverse Transcriptase ta' affinità għolja ta' RNA, RNase Inhibitor, dNTPs, stabilizzaturi, enhancers, optimizers, u reverse transcription primers għal allinjament ottimali (Random Primer, Oligo(dT)₁₈Primer).

Foregene Protease Plus II: Fil-kuntest tal-liżi buffer, iċ-ċelloli huma lisati biex jirrilaxxaw l-aċidi nuklejċi.

2× Dirett qPCR Mix-Taqman: Dan ir-reaġent fih Hot D-Taq DNA Polymerase, dNTPs, MgCl₂, buffer tar-reazzjoni, PCR optimizer, u stabilizzatur.

20 × ROX Reference Dye: Ġeneralment użat fuq strumenti ta 'amplifikazzjoni tal-PCR Real Time ta' ABI, Stratagene u kumpaniji oħra, huwa użat biex jaġġusta d-differenza bejn tubi PCR u tubi kkawżati minn żbalji fid-dożaġġ tal-PCR.Il-konċentrazzjoni ta '20 × ROX Reference Dye meħtieġa għal strumenti differenti hija differenti, u l-utent jista' jżidha skont il-konċentrazzjoni rakkomandata tal-istrument.

Ħieles mill-RNase ddH₂O: Ilma ultra pur sterilizzat mingħajr RNase għal reazzjonijiet RT-qPCR f'żewġ stadji.

Prekawzjonijiet:(Kun żgur li taqra l-prekawzjonijiet bir-reqqa qabel tuża l-kit)

Oqgħod attent għall-metodu ta 'tħaddim ta' l-esperiment biex tevita l-kontaminazzjoni inkroċjata bejn il-kampjuni.

Oqgħod attent għall-indafa tal-ambjent sperimentali u l-utensili biex tevita l-kontaminazzjoni RNase u d-degradazzjoni tal-RNA.

Ħu kampjuni taċ-ċelluli friski jew ippreservati tajjeb u qatt ma tuża kampjuni ripetuti taċ-ċelluli ffriżati u mdewweb.

5 × Direct qPCR Mix, 2 × Direct qPCR Mix-Taqman għandu jevita ffriżar-tidwib ripetut, inkella jaffettwa t-traskrizzjoni inversa u l-effiċjenza tal-PCR.

Preparazzjonijietqabeloperazzjoni

Kun żgur li taqra l-istruzzjonijiet bir-reqqa qabel tuża dan il-kit.Il-Kit Cell Direct RT-qPCR huwa sempliċi, konvenjenti u mgħaġġel biex jopera, u l-istruzzjonijiet jipprovdu informazzjoni kompleta dwar il-kit kollu u kif tużah b'mod korrett.Jekk jogħġbok ipprepara l-materjali u t-tagħmir sperimentali meħtieġa qabel l-użu.

Materjali u tagħmir sperimentali

◆ Ċelloli tal-kultura.

◆ 1.5 ml jew 2 ml, tubu ċentrifugu RNase-/DNase-Free, ponta RNase-/DNase-Free, tubu qPCR sterili ta '0.2 ml.

◆ Magna qPCR, pipetta, ċentrifuga tal-mejda (≥13,400×g) (skont il-ħtiġijiet sperimentali), eċċ.

Sigurtà

◆ Dan il-prodott huwa għal skopijiet ta 'riċerka xjentifika biss, jekk jogħġbok tużahx għal skopijiet farmaċewtiċi, kliniċi, tal-ikel u kożmetiċi.

◆ Meta tuża kimiċi, ilbes ħwejjeġ xierqa tal-laboratorju, ingwanti, nuċċalijiet protettivi, eċċ.

Operazzjonigwidi

Is-sistemi tal-Liżi taċ-Ċelluli, is-sistemi RT, u l-pakketti tas-supplimenti tas-soluzzjoni tar-reazzjoni qPCR jistgħu jinxtraw separatament, għad-dettalji fl-Appendiċi 1 (PAĠNA 13).

Gwida tal-operat

A: Kampjun ta 'rilaxx ta' RNA

1.Ċelloli ġew ittrattati minn qabel: Aħsel il-pjanċa tal-kultura taċ-ċelluli b'PBS kiesaħ, imbagħad lyse iċ-ċelloli (10-10⁶), 10⁶ mill-ammont ta' ċelloli, huwa rakkomandat Foregene the Cell an RNA Isolation Kit the Total (DE-03111) jew Animal Total RNA Isolation Kit (DE-03011) għall-estrazzjoni u l-purifikazzjoni tal-RNA.

1.1.Ċelloli aderenti (pjanċa ta' 24-il tajjeb bħala eżempju)

1.1.1.Iddetermina n-numru ta 'ċelloli f'kull bir, iddetermina li n-numru ta' ċelloli huwa 1 × 10⁵, u uża pipetta biex tneħħi l-mezz tal-kultura mid-dixx tal-kultura.

1.1.2.Żid 200 μl ta' 1 × PBS imkessaħ minn qabel ma' kull bir.Tagħmel il-pipetta ripetutament u neħħi l-PBS mill-bjar.Mejjel il-pjanċa u neħħi kemm jista' jkun PBS.Ipproċedi għall-pass 2.

1.1.3.Dixx tal-kultura taċ-ċelluli differenti jew tabella numru ta 'referenza 1-1 f'dixx tal-kultura taċ-ċelluli ġie miżjud imkessaħ minn qabel 1 × PBS għall-ħasil taċ-ċelluli.

Tabella 1-1: Dożaġġ ta 'PBS għal numri differenti ta' ċelloli

Nota：Biex tiżgura ċelluli aderenti sod,numru kbir ta 'telf ta' ċelluli evitat waqt il-ħasil.

1.2.Ċelloli ta' sospensjoni jew ċelluli aderenti kkultivati ​​fi pjanċi mhux porużi

1.2.1.Ċelloli aderenti kkultivati ​​fi pjanċi mhux multi-well (ċelluli ta 'sospensjoni jibdew mill-pass li jmiss 1.2.2), jiġbru u jisseparaw iċ-ċelloli skond il-metodu ta' ġbir taċ-ċelluli normali, u poġġihom fi pjanċa tal-kultura jew tubu ċentrifugu;jekk tintuża trypsinization, teħtieġ ċentrifugazzjoni biex tiġbor iċ-ċelloli u biex tneħħi trypsin residwu, miżjud ċelloli PBS sospiżi mill-ġdid f'ċelloli individwali biex ixerrdu ċ-ċelloli.

1.2.2.Wara n-numru ta 'ċelluli magħduda, ċelluli alikkwotati 1 × 10⁵ wieħed biex tiċċentrifuga t-tubi, iġbor iċ-ċelloli b'ċentrifugazzjoni f'1000 × g għal 10 min.

1.2.3.Żid 200 μl PBS mat-tubu taċ-ċentrifuga, ma tagħmilx pipetta ripetutament, u aspira direttament il-PBS.ipproċedi għall-pass 2. (Jekk diffiċli biex tippreċipita u ċ-ċelluli ġew sospiżi mill-ġdid, jista 'jitwettaq 1000 × g ċentrifugat 10 min wara li jintrema s-supernatant, il-pellet taċ-ċelluli ipproċedi għall-pass 2)

2.Cell lysis: Neħħi Buffer CL, it-temperatura tiegħu ekwilibrata għat-temperatura tal-kamra, DNA Eraser u Foregene Protease Plus II, skont it-tabella li ġejja 1-2 sistema ta 'liżi ppreparata: (Is-soluzzjoni ta' Lysis hija lesta għall-użu).

Tabella 1-2: qsim preparazzjoni tas-sistema (Nota: fil-preparazzjoni fuq is-silġ)

3.( 24 -well plate bħala eżempju ) Pipetta 200 μl ta 'cell lysis master taħlita f'kull bir, Nefħa ripetutament 5-10 darbiet, Inkuba f'temperatura tal-kamra (20-25 ℃) għal 5 min.

Nota：Biex tevita l-formazzjoni ta 'bżieżaq, jekk jogħġbok meta l-iskala tal-pipetta tal-pipetta ġiet aġġustata għal 200μl jew inqas.Iċ-ċelloli jistgħu jidhru mċajpra wara liżi, li hija normali.

4.(24 -well plate bħala eżempju ) huwa miżjud fil-likwidu 20 μl Buffer ST (sistemi ta 'liżi differenti Buffer ST miżjud f'ammont muri fit-Tabella 1-3), pipettar ripetut 5-10 darbiet, f'temperatura tal-kamra (20-25 ℃ ) ġew inkubati għal 2 min .

Nota：It-tarf tal-pipetta jintrema taħt il-wiċċ, u jiżgura li l-lisat ġie miżjud,biex tiġi evitata l-formazzjoni ta 'bżieżaq, jekk jogħġbok meta l-iskala tal-pipetta tal-pipetta ġiet aġġustata għal 200μl jew inqas.

Tabella 1-3：Żid Buffer ST

5.Il-lisat jintuża għal esperimenti RT-qPCR sussegwenti.Jekk l-esperimenti sussegwenti ma jistgħux jitwettqu fil-ħin, jekk jogħġbok żommha fuq is-silġ għal mhux aktar minn 2 sigħat, u aħżen f'-20 ℃ jew -80 ℃ (mhux aktar minn tliet xhur).

B: Preparazzjoni tas-sistema RT

1.Oħroġ 5 × Direct RT Mix u poġġiha fuq banju tas-silġ, ħalliha dewweb b'mod naturali, u ħawwadha bil-mod għal użu aktar tard;oħroġ RNase-Free ddH2O u dewweb u poġġih fuq banju tas-silġ għal użu aktar tard.Ipprepara s-sistema ta' reazzjoni fuq is-silġ skond it-Tabella 2-1 hawn taħt.

Tabella 2-1: Preparazzjoni tas-sistema ta 'reazzjoni RT

2.Wara t-tlestija tal-formulazzjoni tas-sistema, imħallat bil-mod u ċentrifugati fil-qosor fit-tabella li ġejja 2 -2 kundizzjonijiet ta 'reazzjoni RT reazzjoni.

Tabella 2-2: L-issettjar tal-kundizzjoni tar-Reazzjoni RT

3.Wara t-tlestija tar-reazzjoni, il-prodott tar-reazzjoni tpoġġa direttament fuq is-silġ għal qPCR , jekk jogħġbok poġġi l-preservazzjoni fit-tul -20 ℃ jew -80 ℃ .

Nota: Minħabba l-użu ta 'mudell mhux purifikat, preċipitati bojod jistgħu jidhru fil-prodott ta' traskrizzjoni inversa.Dan huwa fenomenu normali.Iċċentrifuga s-supernatant immedjatament għal esperimenti sussegwenti.

Is-soluzzjoni ta 'reazzjoni RT li tirriżulta hija miżjuda mas-sistemi ta' reazzjoni PCR Real Time Pass li jmiss, huwa rakkomandat li jiżdiedu ammonti li jvarjaw minn 10-30% tas-sistema ta 'reazzjoni.

C: Preparazzjoni tas-sistema ta 'reazzjoni qPCR

1.Ammont xieraq ta 'B ippreparat fil-mudell ta' cDNA tal-pass skont it-tabella 3-1 li ġejja biex tipprepara sistema ta 'reazzjoni.

Nota: L-ammont ta 'mudell ta' cDNA jammonta għal 10-30% tas-sistema qPCR.Per eżempju, f'sistema qPCR ta '20μl, żid 2-6 μl ta' lysis buffer, iżda mhux aktar minn 6 μl.

2.L-ottimizzazzjoni kundizzjonijiet qPCR tajba (Temperatura ta 'l-ittemprar, eċċ.) għar-reazzjoni qPCR (Il-kundizzjonijiet ta' reazzjoni mogħtija fit-Tabella 3-2).

Nota: Ipprova uża kundizzjonijiet ottimizzati għal reazzjonijiet qPCR biex tikseb riżultati aħjar.

Tabella 3-1: Preparazzjoni ta 'sistema ta' reazzjoni PCR

1*: Il-konċentrazzjoni tal-primer tista 'tiġi aġġustata fil-medda ta' 50-900 nM meta l-prestazzjoni tar-reazzjoni tal-primer tkun fqira.

Nota: Is-sistema qPCR tista 'tiġi aġġustata skont il-ħtiġijiet sperimentali u l-mudell taċ-ċiklatur tal-fluworexxenza.Għal qPCR f'50μl sistema, aġġusta d-dożaġġ tar-reaġent proporzjonalment skond il-20μl sistema.

2*: Agħżel il-konċentrazzjoni finali xierqa ta' Żebgħa ta' Referenza ROX skont iċ-ċiklatur termali kwantitattiv tal-fluworexxenza.L-aktar konċentrazzjonijiet xierqa ta’ Żebgħa ta’ Referenza ROX għal ċiklaturi kwantitattivi ta’ fluworexxenza komuni huma murija fit-tabella hawn taħt:

Tabella 3-2: Il-kundizzjonijiet tar-reazzjoni qPCR huma pprovduti

Nota: Sabiex jinkiseb l-aħjar effett qPCR, PCR gradjent jista 'jintuża biex jottimizza l-kundizzjonijiet ta' reazzjoni għal mudelli differenti u primers differenti.Il-kundizzjonijiet tar-reazzjoni tal-PCR ivarjaw skont l-analizzatur tal-fluworexxenza, il-mudell, il-primer, eċċ. Fl-operazzjoni speċifika, il-kundizzjonijiet ottimali ta 'reazzjoni jeħtieġ li jiġu ddisinjati skont il-kundizzjonijiet speċifiċi tal-ċiklatur termali kwantitattiv tal-fluworexxenza, it-tip ta' mudell, id-daqs tal-framment ta 'interess, is-sekwenza bażi tal-framment amplifikat u l-kontenut GC u t-tul tal-primers, inkluża temperatura ta' ttemprar, ħin ta 'reazzjoni, eċċ.

Prinċipji tad-disinn tal-primer tal-PCR Real Time

Forward Primer u Reverse Primer

Għal Real Time PCR, id-disinn tal-primer huwa importanti ħafna.Primers huma relatati mal-ispeċifiċità u l-effiċjenza tal-amplifikazzjoni tal-PCR, u jistgħu jiġu ddisinjati b'referenza għall-prinċipji li ġejjin:

◆ Tul tal-primer: 18-30bp.

◆ Kontenut GC: 40-60%.

◆ Valur Tm: Softwer tad-disinn Primer, bħal Primer 5, jista 'jagħti l-valur Tm tal-primer.Il-valuri Tm tal-primers upstream u downstream għandhom ikunu qrib kemm jista' jkun.Il-formula tal-kalkolu Tm tista' tintuża wkoll: Tm = 4 °C (G + C) + 2 °C (A + T).Meta twettaq PCR, temperatura taħt il-valur Tm primer ta '5 °C ġeneralment tintgħażel bħala t-temperatura tal-ittemprar (iż-żieda korrispondenti fit-temperatura tal-ittemprar tista' żżid l-ispeċifiċità tar-reazzjoni tal-PCR).

◆ Primers u prodotti PCR:

◆ It-tul tal-prodott tal-amplifikazzjoni tal-primer tad-disinn tal-PCR huwa preferibbilment 100-150bp.

◆ Primers tad-disinn fiż-żona strutturali sekondarja tal-mudell għandhom jiġu evitati kemm jista 'jkun.

◆ Evita l-formazzjoni ta '2 bażijiet kumplimentari jew aktar bejn it-truf 3′ ta' primers upstream u downstream.

◆ Primer 3′ bażi terminali ma tistax tkun preżenti bi 3 G jew C konsekuttivi addizzjonali.

◆ Il-primers infushom ma jistgħux ikollhom strutturi komplementari, inkella se tiġi ffurmata struttura ta 'hairpin, li taffettwa l-amplifikazzjoni tal-PCR.

◆ ATCG għandu jitqassam bl-aktar mod indaqs possibbli fis-sekwenza tal-primer, u l-bażi terminali 3′ għandha tiġi evitata bħala T.

Appendiċi1：Cell DirettRT-qPCR Kit komponentt pakkett suppliment

1.Cell Lysis Soluzzjoni