Il-proporzjon baxx ta 'A260/A230 normalment ikun ikkawżat minn impuritajiet bil-wavelength ta' assorbiment massimu f'230nm.Ejja naraw x'inkludu dawn l-impuritajiet:

• Inkwinanti komuni	Wavelength ta' assorbiment	Effett tal-proporzjon
  Proteina	~ 230nm u 280nm	Tnaqqis simultanju ta' A260/A 280u A260/A 280proporzjonijiet
  Melħ tal-guanidina	220-240 nm	Naqqas l-A260/A 280proporzjon
  Fenol	~270nm	-
  Trizol	~ 230nm u 270nm	Naqqas l-A260/A 280proporzjon
  EDTA	~230nm	Naqqas l-A260/A 280proporzjon
  Etanol	230-240 nm	Naqqas l-A260/A 280proporzjon

 
 
 
Wavelength ta 'assorbiment u valur ta' kuntrast ta 'inkwinanti komuni

Pkontaminazzjoni tar-roteina
It-tniġġis tal-proteini jista 'jitqies bħala l-aktar tniġġis komuni fil-proċess ta' estrazzjoni tal-aċidu nuklejku.Il-proteina teżisti bejn il-fażi akwea ta 'fuq u l-fażi t'isfelorganikufażi .It-tniġġis se jnaqqas il-proporzjon ta 'A260/A280 u A260/A230 fl-istess ħin, u l-proporzjon ta' A260/A230 se jinbidel b'mod aktar ovvju mill-proporzjon ta 'A260/A280.
Matul sussegwentitraskrizzjoni inversaor Reazzjonijiet qPCR, residwi tal-proteini jistgħu jinibixxu jew jinterferixxu mal-funzjoni tal-enżimi.L-aħjar mod biex tiġi evitata l-kontaminazzjoni tal-proteini huwa li wieħed iżomm f'moħħu l-prinċipju ta '"pjuttost inqas minn aktar, ammont żgħir ħafna drabi" meta jaspira s-supernatant.

2. Tniġġis tal-guanidinium
hydrochloride (GuHCl) u guanidine thiocyanate (GTC) għandhom l-effett ta 'proteini denaturanti, li jistgħu jeqirdu malajr il-membrani taċ-ċelluli matul il-proċess ta' estrazzjoni ta 'aċidu nuklejku, li jikkawżaw denaturazzjoni u preċipitazzjoni tal-proteini.Il-wavelength ta' assorbiment ta' GuHCl u GTC huwa bejn 220-240 nm, u l-melħ residwu tal-guanidinium se jnaqqas il-proporzjon ta 'A260/A230.Għalkemm il-melħ residwu tal-guanidinium se jnaqqas il-proporzjon,l-impatt fuq esperimenti downstream huwa fil-fatt negliġibbli.

3. Kontaminazzjoni tat-trizol
Il-komponent ewlieni ta' Trizol huwa l-fenol.Il-funzjoni ewlenija tal-fenol hija li lyse ċelluli u rilaxx proteini u sustanzi ta 'aċidu nuklejku fiċ-ċelloli.Għalkemm il-fenol jista 'jiżnatura l-proteini b'mod effettiv, ma jistax jinibixxi kompletament l-attività RNase.Għalhekk, 8-hydroxyquinoline, guanidine isothiocyanate, β-mercaptoethanol, eċċ huma miżjuda ma 'TRIzol biex jinibixxu RNase endoġenu u eżoġenu.
Meta jiġi estratt l-RNA ċellulari, Trizol jista 'lise malajr iċ-ċelloli u jinibixxi n-nukleażi rilaxxata miċ-ċelloli, u t-Trizol residwu se jnaqqas b'mod sinifikanti l-proporzjon ta' A260/A230.
Metodu ta 'proċessar: Waqt iċ-ċentrifugazzjoni, għandu jiġi nnutat li l-fenol fi Trizol jinħall faċilment fil-fażi tal-ilma taħt il-kondizzjoni ta' 4 ° u temperatura tal-kamra.

4. Residwu ta' etanol
L-etanol jintuża fil-proċess finali biex jippreċipita d-DNA filwaqt li jinħall jonji tal-melħ li jistgħu jkunu marbuta mad-DNA.Il-wavelength ta 'assorbiment ta' l-ogħlaquċċata ta 'assorbiment ta'etanol huwa wkoll f'230-240 nm, lise jnaqqas ukoll il-proporzjon ta 'A260/A230.
Il-metodu biex jiġi evitat ir-residwu tal-etanol jista 'jiġi ripetut darbtejn matul l-elużjoni finali, blowing fil-barnuża tad-dħaħengħal żewġ minuti biex tħalli l-etanol jevapora kompletament qabel ma żżid il-buffer għall-elużjoni.
Madankollu, għandu jkun magħruf li l-proporzjon huwa biss indiċi ta 'evalwazzjoni tal-kwalità tal-RNA.Jekk l-operazzjonijiet imsemmija hawn fuq huma regolati b'mod strett, id-devjazzjoni bejn il-proporzjon u l-firxa standard mhux se jkollha impatt kbir fuq esperimenti downstream.
Prodotti Relatati:
Kit ta' iżolament ta' RNA totali ta' l-annimali
Kit tal-Iżolament tal-RNA Totali tal-Pjanti
Kit ta' iżolament ta' RNA totali taċ-ċelluli
Plant Total RNA Isolation kit Plus