X'inhu vaċċin mRNA
Il-vaċċin tal-mRNA jittrasferixxi RNA liċ-ċelloli tal-ġisem biex jesprimi u jipproduċi antiġeni tal-proteini wara modifiki rilevanti in vitro, u b'hekk iwassal lill-ġisem biex jipproduċi rispons immuni kontra l-antiġen, u b'hekk jespandi l-kapaċità immuni tal-ġisem.[1,3].
Figura 1: Dijagramma skematika tal-effett tal-injezzjoni diretta tal-vaċċin tal-mRNA [2]
Klassifikazzjoni tal-vaċċini mRNA
Il-vaċċini tal-mRNA huma maqsuma f'żewġ tipi:nonreplicatingmRNA uawto-amplifikazzjonimRNA: mRNA li jamplifika lilu nnifsu mhux biss jikkodifika l-antiġen fil-mira, iżda jikkodifika wkoll ir-replikazzjoni li tippermetti l-amplifikazzjoni intraċellulari tal-RNA u l-mekkaniżmu tal-espressjoni tal-proteini.Vaċċini tal-mRNA li ma jirreplikawx biss jikkodifikaw antiġeni fil-mira u fihom reġjuni 5' u 3' mhux tradotti (UTR).Huma jipprovdu stimulazzjoni komprensiva ta 'adattabilità u immunità intrinsika, jiġifieri espressjoni ta' antiġen in situ u trażmissjoni ta 'sinjali ta' periklu, u għandhom l-applikazzjonijiet li ġejjin Karatteristiċi[2,3]
●Can tipprovdi stimulazzjoni komprensiva ta 'adattabilità u immunità intrinsika, jiġifieri espressjoni ta' antiġenu in situ u trasmissjoni ta 'sinjali ta' periklu
●Can jinduċi rispons immuni "bilanċjat", inklużi effectors umorali u ċellulari u memorja immuni
●Can jgħaqqdu antiġeni differenti mingħajr ma tiżdied il-kumplessità tal-formulazzjoni tal-vaċċin
●Titjib kontinwu tal-potenzjal immuni jista 'jinkiseb permezz ta' tilqim ripetut, u m'hemm l-ebda jew ftit rispons immuni għat-trasportatur
●Heat stabbli mRNA vaċċini jistgħu jissimplifikaw it-trasport u l-ħażna tal-vaċċini
Figura 2: Dijagramma skematika tal-vaċċin tal-mRNA u l-mekkaniżmu tal-espressjoni tal-antiġenu tiegħu [4]
Karatteristiċi tal-vaċċini mRNA
Meta mqabbla ma 'vaċċini tradizzjonali, vaċċini mRNA għandhom proċessi ta' produzzjoni sempliċi, veloċitajiet ta 'żvilupp mgħaġġla, l-ebda ħtieġa għal kultura taċ-ċelluli, u prezz baxx.Meta mqabbel mal-vaċċini tad-DNA, il-vaċċini tal-mRNA m'għandhomx għalfejn jidħlu fin-nukleu u m'hemm l-ebda riskju ta 'integrazzjoni fil-ġenoma ospitanti.Il-half-life tista 'tiġi aġġustata b'modifika.
Tabella 1: Vantaġġi u żvantaġġi tal-vaċċini mRNA
|
| Vantaġġ | Nuqqas |
| vaċċin mRNA | Riċerka u żvilupp rapidu, il-produzzjoni tal-vaċċin tieħu biss 40 jum | Tqajjem rispons immuni bla bżonn
|
| Instabilità tal-mRNA taħt kundizzjonijiet fiżjoloġiċi, faċli biex tiddegrada | Mhux se jintegra fil-ġenoma biex jiġu evitati mutazzjonijiet terapewtiċi possibbli
| |
| Ebda ħtieġa għal xi sinjal ta 'lokalizzazzjoni nukleari, traskrizzjoni | L-effettività tas-sikurezza nukleari għad trid tiġi vverifikata
|
Figura 3: Tabella tal-fluss tal-produzzjoni u l-preparazzjoni tal-vaċċin mRNA [4]
Foregene Viral RNA Isolation Kit
RT-qPCR Easy (Pass Wieħed)
Strateġiji mtejba għall-preparazzjoni ta 'vaċċini mRNA
Minħabba l-istabbiltà fqira tal-mRNA innifsu, id-degradazzjoni faċli minn nucleases fit-tessuti, l-effiċjenza baxxa tad-dħul taċ-ċelluli, u l-effiċjenza baxxa tat-traduzzjoni, dawn id-difetti jillimitaw l-applikazzjoni tal-vaċċini tal-mRNA.L-effiċjenza tat-traduzzjoni għandha wkoll rwol kritiku ħafna.Vetturi ta 'konsenja jistgħu jinqasmu f'vetturi virali u vettori mhux virali (inklużi liposomi, mhux lipożomi, viruses, nanopartiċelli, eċċ.).Għalhekk, huma meħtieġa miżuri ta' titjib rilevanti.Din li ġejja hija strateġija ta 'titjib farmakoloġiku għall-preparazzjoni ta' mRNA[2]
1 Sintetizza analogi tal-kappa jew uża enzimi ta' capping biex tistabbilizza l-mRNA u żżid it-traduzzjoni tal-proteini billi torbot mal-fattur ta' bidu tat-traduzzjoni ewkarjotiku 4E (EIF4E)
2 Aġġusta l-elementi fir-reġjun 5′-untranslated (UTR) u 3′-UTR biex tistabbilizza l-mRNA u żżid it-traduzzjoni tal-proteini
3 Iż-żieda ta 'denb Poly(A) tista' tistabbilizza l-mRNA u żżid it-traduzzjoni tal-proteini
4 Nukleosidi modifikati biex inaqqsu l-attivazzjoni immuni intrinsika u jżidu t-traduzzjoni
5 Trattament b'RNase III u purifikazzjoni tal-kromatografija likwida tal-proteina mgħaġġla (FPLC) jistgħu jnaqqsu l-attivazzjoni immuni u jżidu t-traduzzjoni
6 Ottimizza sekwenzi jew kodoni biex tiżdied it-traduzzjoni
7 Ko-kunsinna ta' fatturi ta' bidu tat-traduzzjoni u metodi oħra biex tinbidel it-traduzzjoni u l-immunoġeniċità
Figura 4: Traskrizzjoni in vitro (IVT) mRNA produzzjoni u proċess ta 'assemblaġġ [5]
Preparazzjoni fuq skala kbira tad-DNA tal-plasmid
Il-purifikazzjoni tad-DNA tal-plasmid prinċipalment tneħħi kontaminanti bħal RNA, endotossina tad-DNA b'ċirku miftuħ, proteina ospitanti u aċidu nuklejku ospitanti, u ġeneralment tittrasforma plasmid rikombinanti f'E. coli.E. coli jgħaddi minn fermentazzjoni ta 'densità għolja, imbagħad separazzjoni solidu-likwidu, u ġbir ta' E. coli.L-E. coli mbagħad tiġi soġġetta għal liżi alkalina, separazzjoni ċentrifugali solidu-likwidu u kjarifika ta 'mikrofiltrazzjoni wara liżi, ultrafiltrazzjoni u konċentrazzjoni wara kjarifika, u mbagħad purifikazzjoni kromatografika.
Purifikazzjoni tad-DNA tal-plasmid:
Foregene Ġenerali Plasmid Mini Kit
【1】苗鹤凡, 郭勇, 江新香.mRNA疫苗研究进展及挑战[J].免疫学杂志, 2016(05):446-449.
【2】Pardi N, Hogan MJ, Porter FW, et al.Vaċċini mRNA — era ġdida fil-vaċċinoloġija[J].Nature Reviews Drug Discovery, 2018.
【3】Kramps T., Elbers K. (2017) Introduzzjoni għal Vaċċini RNA.Fi: Kramps T., Elbers K. (eds) Vaċċini RNA.Metodi fil-Bijoloġija Molekulari, vol 1499. Humana Press, New York, NY.
【4】Maruggi G , Zhang C , Li J , et al.mRNA bħala Teknoloġija Trasformattiva għall-Iżvilupp ta' Vaċċini għall-Kontroll tal-Mard Infettiv[J].Terapija Molekulari, 2019.
【5】Sergio Linares-Fernández, Céline Lacroix, ,Tfassal Vaċċin tal-mRNA biex Jibbilanċja Rispons Immune Innat/Adattiv, Xejriet fil-Mediċina Molekulari,Volum 26, Ħarġa 3,2020,Paġni 311-323.
Ħin tal-post: Awissu-05-2021
