Magna PCR|Tassew tifhem?

Teknoloġija PCR rebbieħa tal-Premju Nobel

Fl-1993, ix-xjenzat Amerikan Mulis irċieva l-Premju Nobel fil-Kimika, u l-kisba tiegħu kienet l-invenzjoni tat-teknoloġija PCR.Il-maġija tat-teknoloġija PCR hija fil-karatteristiċi li ġejjin: L-ewwelnett, l-ammont ta 'DNA li għandu jiġi amplifikat huwa estremament żgħir, u teoretikament molekula waħda tista' tintuża għall-amplifikazzjoni;it-tieni, l-effiċjenza tal-amplifikazzjoni hija għolja, u l-ammont tal-ġene fil-mira huwa esponenzjali.Amplifikazzjoni, aktar minn 10 miljun darba fi ftit sigħat.Issa l-istrument PCR intuża ħafna fir-riċerka tax-xjenza tal-ħajja u ħafna aspetti oħra.

Mudelli u manifatturi differenti ta 'ċiklaturi termali jistgħu juru prestazzjoni u ripetibbiltà differenti.Dawn id-differenzi jaffettwaw mhux biss l-effiċjenza tal-PCR iżda wkoll l-eżattezza u l-konsistenza tad-dejta miksuba.Il-fehim tal-karatteristiċi tal-magni PCR jista 'jgħinna nimmassimizzaw is-suċċess tal-esperimenti tagħna.

Modulu tat-tisħin

L-eżattezza tat-temperatura taċ-ċiklatur termali tista 'tkun deċiżiva għas-suċċess jew il-falliment tal-PCR.Il-konsistenza tat-temperatura minn bir-bir fuq il-blokka tat-tisħin hija wkoll kritika biex jinkisbu riżultati PCR affidabbli u riproduċibbli.

Mod wieħed biex tiġi żgurata l-eżattezza termali huwa li tittestja ta 'spiss bl-użu ta' kits ta 'verifika tat-temperatura u tikkalibra mill-ġdid kif meħtieġ minn professjonist imħarreġ.It-testijiet tal-verifika tat-temperatura huma tipikament użati biex:

Preċiżjoni mill-bir għal-bir relattiva għat-temperatura stabbilita fil-modalità iżotermika

Preċiżjoni mill-bir għall-bir relattiva għat-temperatura stabbilita wara l-konverżjoni tat-temperatura

Preċiżjoni tat-Temperatura tal-Għatu tas-Sħana

Kontroll tat-Temperatura tat-Ttemprar tal-Primer

Il-kontroll tat-temperatura tal-gradjent huwa funzjoni tal-istrument tal-PCR li jiffaċilita l-ottimizzazzjoni tal-ittemprar tal-primer fil-PCR.L-iskop tal-issettjar tal-gradjent huwa li jinkisbu temperaturi li jvarjaw bejn il-moduli, u b'temperatura ta '≥2°C żieda u tnaqqis bejn kull kolonna, temperaturi differenti jistgħu jiġu ttestjati simultanjament biex tinkiseb l-aħjar temperatura tal-ittemprar tal-primer.Teoretikament, gradjent veru jikseb temperatura lineari bejn il-moduli.

Madankollu, ċiklaturi termali gradjent konvenzjonali tipikament jimpjegaw blokka termali waħda u temperatura ta 'kontroll permezz ta' żewġ elementi ta 'tisħin u tkessiħ li jinsabu fiż-żewġt itruf, ħafna drabi jirriżultaw fil-limitazzjonijiet li ġejjin:

Jistgħu jiġu ssettjati biss żewġ temperaturi: it-temperaturi għoljin u baxxi għall-ittemprar tal-primer huma ssettjati fiż-żewġt itruf tal-modulu termali, u l-issettjar preċiż ta 'temperaturi oħra ma jistax jinkiseb bejn il-modulu

Minħabba l-iskambju tas-sħana bejn il-kolonni differenti, it-temperatura bejn ir-reġjuni differenti fuq il-modulu hija aktar probabbli li ssegwi kurva sigmojdali aktar milli gradjent lineari veru.

Temperatura tal-kampjun

Il-kapaċità taċ-ċiklatur termali li jikkontrolla t-temperatura tal-kampjun hija importanti ħafna għall-eżattezza tar-riżultati tal-PCR.Parametri speċifiċi għall-istrumenti bħal rati tar-rampa, ħinijiet ta 'żamma, u algoritmi huma kritiċi għat-tbassir tat-temperatura tal-kampjun.

Ir-rata ta 'tisħin u tkessiħ tal-magna tal-PCR tfisser li t-temperatura tinbidel bejn il-passi tal-PCR li jseħħu fuq ċertu perjodu ta' żmien.Peress li tieħu ċertu ammont ta 'żmien biex is-sħana tittrasferixxi mill-modulu għall-kampjun, ir-rata attwali tat-tisħin u t-tkessiħ tal-kampjun tkun aktar bil-mod.Għalhekk, id-definizzjoni tal-veloċità tal-bidla fit-temperatura teħtieġ li tiġi distinta u mifhuma.

Ir-rata tar-rampa massima jew tal-ogħla modulu tirrappreżenta l-aktar bidla mgħaġġla fit-temperatura li l-modulu jista 'jikseb fuq perjodu żgħir ħafna ta' żmien matul ir-rampa.

Ir-rata medja tar-rampa tal-blokk tirrappreżenta r-rata ta 'bidla fit-temperatura fuq perjodu itwal ta' żmien u se tipprovdi miżura aktar rappreżentattiva tal-veloċità tal-magna PCR.

Ir-rata massima tat-tisħin u t-tkessiħ tal-kampjun u r-rata medja tat-tisħin u t-tkessiħ tal-kampjun jirriflettu t-temperatura attwali miksuba mill-kampjun.Ir-rata tat-tisħin u t-tkessiħ tal-kampjun se tipprovdi paragun aktar preċiż tal-prestazzjoni tal-magna tal-PCR u l-impatt potenzjali tagħha fuq ir-riżultati tal-PCR.

Meta twettaq sostituzzjoni ta 'cycler, huwa rakkomandat li tuża strument bi programm ta' rata ta 'rampa li jissimula l-mod ta' qabel għal sostituzzjoni aktar faċli u impatt minimu fuq ir-ripetibbiltà tal-PCR.

Iċ-ċiklatur termali għandu jkun iddisinjat għal passi ta' ħin biss wara li l-kampjun jilħaq it-temperatura stabbilita.B'dan il-mod, il-ħin li l-kampjun jinżamm fit-temperatura stabbilita se jinżamm b'mod aktar preċiż bil-kundizzjonijiet taċ-ċiklu korrispondenti meħtieġa fil-proċedura operattiva.

Iċ-ċiklaturi termali ħafna drabi jużaw algoritmi matematiċi kumplessi biex jiżguraw li l-kampjuni jistgħu jilħqu temperatura stabbilita malajr skont programm issettjat minn qabel.Ibbażat fuq il-volum tas-sistema ta 'reazzjoni u l-ħxuna tal-plastik PCR użat, l-algoritmu jista' jbassar it-temperatura tal-kampjun u l-ħin li se tieħu biex tilħaq it-temperatura stabbilita.Filwaqt li bbażat ruħha fuq dawn l-algoritmi, matul il-proċess tat-tisħin jew tat-tkessiħ taċ-ċiklatur termali, it-temperatura tal-blokka ġeneralment taqbeż il-valur stabbilit permezz ta 'proċess imsejjaħ overshoot jew undershoot tal-blokk termali.Setup bħal dan jiżgura li l-kampjun jilħaq it-temperatura ssettjata malajr kemm jista 'jkun mingħajr ma jinqabeż jew jinqabeż innifsu.

Trażmissjoni sperimentali

Fatturi li jistgħu jżidu l-produzzjoni ta 'ċiklatur termali jinkludu rati ta' rampa, konfigurazzjonijiet ta 'blokki termali, u integrazzjoni ta' pjattaformi ta 'awtomazzjoni.

Ir-rata tat-tisħin u t-tkessiħ tat-termal cycler tirrappreżenta l-veloċità li biha tilħaq it-temperatura stabbilita.Iktar ma t-temperatura togħla u tinżel malajr, iktar se taħdem malajr il-PCR, li jfisser li jistgħu jitlestew aktar esperimenti f'perjodu ta 'żmien partikolari.Barra minn hekk, l-esperimenti jistgħu jiġu aċċellerati bl-użu ta 'polimerażi tad-DNA aktar mgħaġġla.

Id-disinn tal-modulu taċ-ċiklatur termali huwa wkoll kruċjali għall-esperimenti tal-PCR.Pereżempju, moduli sostitwibbli jippermettu flessibilità fin-numru ta 'kampjuni għal kull ġirja.Barra minn hekk, il-moduli tat-tisħin b'moduli kontrollabbli individwalment huma ideali biex imexxu programmi PCR differenti simultanjament fuq ċiklu termali wieħed.

Għal PCR awtomatizzat b'rendiment għoli, is-softwer li jikkontrolla s-sistema tal-immaniġġjar tal-pipetta għandu jkun programmabbli u kompatibbli.Is-sistemi awtomatizzati huma ideali biex iwettqu reazzjonijiet PCR b'rendiment għoli minħabba li jistgħu jitmexxew kontinwament bi ftit intervent uman, u b'hekk jimminimizzaw il-ħin meħtieġ għal setup sperimentali manwali u jiżdied in-numru ta 'reazzjonijiet f'perjodu ta' żmien partikolari.

Affidabilità, Durabilità u Assigurazzjoni tal-Kwalità taċ-Ċikli Termali

Minbarra l-kapaċitajiet ta 'prestazzjoni u throughput, il-magna PCR għandha wkoll tkun kapaċi tiflaħ ċertu użu ripetut, stress ambjentali, u kundizzjonijiet tat-tbaħħir.Xi manifatturi jistgħu jirrappurtaw dwar kif l-istrument iwettaq testijiet ta 'affidabbiltà u durabilità.L-iskoperta korrispondenti tal-istrument PCR tinkludi:

Affidabilità: Rigs mekkaniċi huma wżati biex iwettqu testijiet ripetuti fuq komponenti ta 'strumenti użati ta' spiss bħal għotjien termali, pannelli tal-kontroll/touchscreens, u moduli taċ-ċikliżmu tat-temperatura.

Pressjoni ambjentali: Kmamar ambjentali jistgħu jintużaw biex jissimulaw kundizzjonijiet differenti ta 'esperimenti ta' rutina, bħal temperatura, umdità.

Ittestjar tat-Tbaħħir: Ittestjar ta 'xokk intens u vibrazzjoni jista' jsir skond l-istandards ta 'l-Assoċjazzjoni Internazzjonali tat-Tbaħħir tas-Sigurtà biex jiġi żgurat li l-istrument jista' jasal f'kundizzjonijiet operattivi mingħajr ħsara.

Garanzija u servizz għaż-żamma tal-magna PCR

Minkejja ttestjar rigoruż ta 'affidabbiltà u durabilità, iċ-ċiklaturi termali inevitabbilment għandhom kwistjonijiet tekniċi matul il-ħajja tal-istrument.Għall-paċi tal-moħħ, il-garanzija, is-servizz u l-manutenzjoni tal-manifattur għandhom jiġu kkunsidrati meta tixtri strument.

Il-flessibilità ta 'servizzi bħal manutenzjoni fuq il-post/ritorn għall-fabbrika, servizzi ta' monitoraġġ mill-bogħod, u strumenti ta 'sostituzzjoni fil-proċess ta' manutenzjoni, eċċ., Biex jitnaqqas l-impatt fuq l-effiċjenza tax-xogħol.

It-tul tal-perjodu ta 'garanzija, il-ħin tat-tibdil tas-servizz, l-aċċessibbiltà ta' appoġġ tekniku, u l-ħiliet tal-persunal ta 'appoġġ professjonali.

Il-fattibbiltà tal-installazzjoni, it-tħaddim, il-kooperazzjoni u l-verifika tal-istrumenti biex jintlaħqu rekwiżiti regolatorji tal-laboratorju u relatati.Servizzi ta 'manutenzjoni bħall-verifika tat-temperatura, l-ittestjar u l-kalibrazzjoni huma disponibbli biex jiżguraw li l-istrument jaħdem sew bil-parametri korrispondenti.

Prodotti Relatati: