Il-karatteristika pendenti tar-reazzjoni PCR hija l-kapaċità ta 'amplifikazzjoni kbira tagħha u s-sensittività estremament għolja.Sabiex intejbu l-prestazzjoni tal-PCR u l-effiċjenza tas-sejbien, aħna impenjati li ntejbu l-kapaċità tal-amplifikazzjoni tal-PCR u s-sensittività tal-iskoperta, iżda l-uġigħ ta 'ras jinsab fil-proċess tal-esperiment.Ħafna drabi jseħħu pożittivi foloz, u ammont żgħir ħafna ta 'kontaminazzjoni inkroċjata tal-kampjun jew kontaminazzjoni tal-prodott tal-PCR jista' jikkawża pożittivi foloz fl-esperiment.
Ħames tipi ta 'kontaminazzjoni tal-prodott PCR
Hemm ħafna raġunijiet għall-kontaminazzjoni tal-PCR, li jistgħu jinqasmu bejn wieħed u ieħor fil-kategoriji li ġejjin:
Il-kontaminazzjoni tal-kampjun hija prinċipalment ikkawżata mill-kontaminazzjoni tal-kontenitur għall-ġbir tal-kampjun, jew meta l-kampjun jitqiegħed, ikun nixxew mill-kontenitur minħabba siġillar maħlul, jew il-kampjun huwa mwaħħal ma 'barra tal-kontenitur, li jikkawża kontaminazzjoni inkroċjata;Il-kontaminazzjoni twassal għal kontaminazzjoni bejn il-kampjuni;xi kampjuni mikrobjali, speċjalment viruses, jistgħu jinfirxu bl-ajrusols jew jiffurmaw aerosols, li jirriżultaw f'kontaminazzjoni reċiproka.
Ir-raġuni ewlenija hija li waqt il-preparazzjoni tar-reaġenti tal-PCR, il-pistola tal-kampjun, il-kontenitur, l-ilma distillat doppju u soluzzjonijiet oħra huma kkontaminati mill-mudell tal-aċidu nuklejku tal-PCR.
Fil-laboratorji tal-bijoloġija molekulari u xi laboratorji li jużaw plasmidi kklonati bħala kontrolli pożittivi, il-problema tal-kontaminazzjoni tal-plażmidi kklonati hija wkoll komuni.Minħabba li l-kontenut tal-plażmid tal-klonazzjoni fil-volum tal-unità huwa pjuttost għoli, u aktar għodod u reaġenti huma meħtieġa fil-proċess ta 'purifikazzjoni, u l-plasmid fiċ-ċelloli ħajjin x'aktarx li jkun ikkontaminat minħabba t-tkabbir qawwi u l-kapaċità ta' riproduzzjoni taċ-ċelloli ħajjin.
Il-kontaminazzjoni ta 'prodotti amplifikati hija l-aktar problema ta' kontaminazzjoni komuni fir-reazzjonijiet tal-PCR.Minħabba li l-kwantità tal-kopja tal-prodott tal-PCR hija kbira (ġeneralment 1013-il kopja/ml), li hija ferm ogħla mil-limitu tan-numru tal-kopja tal-kxif tal-PCR, ammont żgħir ħafna ta 'kontaminazzjoni tal-prodott tal-PCR jista' jikkawża pożittivi foloz.
It-tniġġis tal-ajrusol huwa l-aktar forma probabbli ta 'kontaminazzjoni tal-prodotti tal-PCR, u hija wkoll l-aktar faċli li tiġi injorata.Huwa ffurmat mill-frizzjoni bejn il-wiċċ tal-likwidu u l-arja.Ġeneralment, il-kontaminazzjoni tal-ajrusol tista 'tiġi ffurmata meta l-għatu jinfetaħ, meta l-kampjun jiġi aspirat, jew anke meta t-tubu tar-reazzjoni jitħawwad b'mod vigoruż.Skont il-kalkoli, partiċella tal-ajrusol jista 'jkun fiha 48,000 kopja, għalhekk it-tniġġis ikkawżat minnha hija problema li jistħoqqilha attenzjoni speċjali.
B'mod partikolari, il-laboratorji tal-ittestjar spiss jużaw l-istess par ta 'primers biex jittestjaw ċertu ġene.Maż-żmien, ammont kbir ta 'kontaminazzjoni tal-prodott PCR se jseħħ fl-ispazju tal-laboratorju.Ladarba sseħħ tali kontaminazzjoni, huwa diffiċli li tiġi eliminata fi żmien qasir.
Għall-ewwel tliet tipi ta 'tniġġis, nistgħu nużaw mezzi effettivi biex nevitaw, iżda t-tniġġis ikkawżat minn prodotti PCR huwa diffiċli biex jiġi evitat, speċjalment fil-kostruzzjoni ta' laboratorji PCR mhux standard.Fil-proċess tal-PCR, meta t-tarf tal-pipetta terda u jonfoħ il-likwidu, u l-għatu tat-tubu tal-PCR jinfetaħ, jiġi ffurmat ajrusol.Il-molekuli tad-DNA li jinġarru mill-aerosol (aerosol wieħed jista 'jġorr għexieren ta' eluf ta 'DNA) huma diffiċli biex jiġu eliminati minħabba li jżommu f'wiċċ l-ilma fl-arja.Ladarba r-rawnd li jmiss ta 'esperimenti PCR jiġu introdotti, pożittivi foloz inevitabbilment iseħħu.
Kif muri fil-figura hawn taħt, il-kontroll negattiv amplifika wkoll il-faxxa korrispondenti ta 'interess:
L-ewwel parti ta 'din il-kwistjoni tat-tniġġis u l-prevenzjoni tal-PCR hija introdotta hawnhekk.Il-ħarġa li jmiss ser iġġiblek it-tieni parti "Prevenzjoni tal-kontaminazzjoni tal-prodott PCR", għalhekk ibqa' sintonizzat!
Ħin tal-post: Lulju-25-2017
