Awturi: Wang Xiaoyan, Zhao Eryu

Unità: Isptar Jiaozhou, Isptar Dongfang Affiljat mal-Università ta 'Tongji

Fil-preżent, it-tip ta 'kampjun ewlieni għall-iskoperta tal-aċidu nuklejku tal-patoġenu respiratorju huwa swab tal-gerżuma.Hemm ħafna tipi ta 'soluzzjonijiet ta' preservazzjoni ta 'kampjuni użati b'mod komuni, li kollha jeħtieġ li jiġu mkessħa jew iffriżati għat-trasport u l-ħażna;Huwa diffiċli li jiġi kkontrollat ​​il-proċess kollu ta 'temperatura baxxa matul il-proċess ta' ġbir u trasport, u huwa diffiċli li jiġi żgurat il-kontroll tal-kwalità qabel l-ittestjar tal-kampjuni^[1-2].

RNase (RNase) hija endonukleażi li idrolizza l-RNA, prinċipalment jaqtgħu r-rabtiet fosfodiesteri bejn in-nukleotidi.Il-molekula RNase hija stabbli ħafna, hemm rabtiet disulfide fl-istruttura, u l-attività tagħha ma teħtieġx il-preżenza ta 'katjoni divalenti, għalhekk RNase mhix denaturata faċilment, u huwa faċli li terġa' tinnatura anki wara temperatura għolja jew l-użu ta 'denaturanti.RNases huma maqsuma f'dawk endoġeni u eżoġeni.L-RNases endoġeni jistgħu jiġu rilaxxati fl-istess ħin meta ċ-ċelloli jinkisru.Għalhekk, l-eliminazzjoni tar-rwol ta 'RNases endoġeni hija pass kritiku ħafna fil-proċess ta' estrazzjoni ta 'RNA.RNases eżoġeni huma mqassma ħafna.L-RNases jeżistu fl-arja, fil-ġilda tal-bniedem, fix-xagħar u fil-bżieq, li huma raġunijiet importanti għad-degradazzjoni faċli tal-RNA^[3].

Mistoqsija tad-dejta

CANS-CL02-A009 "Applikazzjoni ta 'Linji Gwida ta' Akkreditazzjoni tal-Kwalità tal-Laboratorju Mediku u tal-Kompetenza fil-Qasam tad-Djanjożi Molekulari" fir-rekwiżiti tekniċi tipproponi li għandhom jiġu fformulati standards xierqa tal-kwalità tal-ilma skont l-applikazzjoni;Kontenituri mitbuq li jintremew:

RNase/Klassifikazzjoni

(1) RNase A

Ribonuclease A (RNase A), derivat mill-frixa bovina, huwa endoribonuclease li jista 'jattakka speċifikament it-tarf 3' tar-residwi ta' pyrimidine fuq l-RNA, qtugħ ta 'ċitosina jew uracil iffurmat minn nukleotidi maġenb.Rabta tal-fosfodiesteru, il-prodott finali tar-reazzjoni huwa nukleotide 3′ pyrimidine u oligonukleotide b'nukleotide 3′ pyrimidine fl-aħħar.

(2) RNase T1

Ribonuclease T1 (RNase T1) hija derivata minn Aspergillus orjzae, taġixxi speċifikament fuq il-fosfat 3′-terminal ta 'guanine, u s-sit tal-qsim huwa bejn it-3′ fosfat ta' guanine u l-5′ hydroxyl ta 'nukleotidi adjaċenti.Il-prodott finali tar-reazzjoni huwa 3'guanylic acid u frammenti ta 'oligonucleotide bi 3'guanylic acid fl-aħħar.

(3) RNase H

Ribonuclease H (RNase H) ġiet skoperta għall-ewwel darba minn tessut tat-timu tal-għoġol, u l-ġene ta 'kodifikazzjoni tiegħu ġie kklonat f'Escherichia coli.Jista 'jiddegrada speċifikament id-DNA: linji ta' RNA f'duplexes ibridi RNA, li jirriżultaw f'oligonukleotidi u mononukleotidi bi truf 3′-OH u 5′-monofosfat, ma jistax jiddegrada DNA jew RNA b'linja waħda jew doppja.

RNase

Funzjoni u użu

Ribonuclease jista 'jikkatalizza d-degradazzjoni tal-aċidu ribonuklejku (RNA) u jista' jiġi sintetizzat b'mod artifiċjali.L-ingwent mediċinali jintuża topikament biex jikkura trawma u uġigħ fil-ġogi.Skont rapporti, ribonuclease jista 'jbiddel il-metaboliżmu taċ-ċelluli ospitanti, jinibixxi s-sintesi tal-virus, jinibixxi l-proliferazzjoni tal-virus tal-influwenza in vitro, u jinibixxi l-formazzjoni ta' vaccinia u virus herpes fl-embrijuni tat-tiġieġ.Użu kliniku ta 'ribonuclease injezzjoni intramuskolari ta' kuljum ta '180 mg, ta' benefiċċju għat-trattament ta 'enċefalite epidemika, ribonuclease jista' jikkatalizza d-degradazzjoni tal-aċidu ribonuklejku (RNA), u issa jista 'jiġi sintetizzat artifiċjalment.L-ingwent mediċinali jintuża topikament biex jikkura trawma u uġigħ fil-ġogi.Skont rapporti, ribonuclease jista 'jbiddel il-metaboliżmu taċ-ċelluli ospitanti, jinibixxi s-sintesi tal-virus, jinibixxi l-proliferazzjoni tal-virus tal-influwenza in vitro, u jinibixxi l-formazzjoni ta' vaccinia u virus herpes fl-embrijuni tat-tiġieġ.L-użu kliniku ta 'ribonuclease injezzjoni intramuskolari ta' kuljum ta '180 mg huwa ta' benefiċċju għat-trattament ta 'enċefalite epidemika.

RNase

Definizzjoni ta' inibitur

Definizzjoni ta 'unità ta' inibitur RNase: L-ammont ta 'enzima meħtieġ biex jinibixxi 50% tal-attività ta' 5ng RNase A huwa unità waħda.

Kif jaħdmu l-Inibituri RNase

Guanidine isothiocyanate:

Guanidine isothiocyanate huwa kompost organiku bil-formula molekulari C2H6N4S.Prinċipalment użat fil-mediċina bijoloġika, reaġenti kimiċi, eċċ Guanidine isothiocyanate huwa aġent liżi tal-proteini, u ħafna drabi jintuża bħala l-komponent ewlieni tas-soluzzjoni tal-lisi f'reaġenti dijanjostiċi molekulari.Jista 'liża t-tessut, jeqred l-istruttura taċ-ċelluli u jiddissoċja l-aċidu nuklejku min-nukleoproteina, u għandu denaturazzjoni qawwija għal RNase.Huwa l-iktar inibitur effettiv ta 'RNase fil-preżent.

TRIzol huwa reaġent ġdid ta 'estrazzjoni ta' RNA totali li jista 'estratt direttament RNA totali minn ċelloli jew tessuti.Fih sustanzi bħal fenol u guanidine isothiocyanate, li jistgħu jfixklu malajr iċ-ċelluli u jinibixxu nucleases rilaxxati miċ-ċelloli.

(Madankollu, il-guanidine isothiocyanate huwa perikoluż għas-saħħa tar-riċerkaturi tal-laboratorju.)

RNasin:

Glikoproteina aċiduża estratta mill-fwied tal-firien jew blastoderm uman.Rnasin huwa inibitur mhux kompetittiv ta 'RNase, li jista' jorbot ma 'diversi RNases biex jinattivahom.

(Aktar dettalji: https://www.foreivd.com/foreasy-rnase-inhibitor-product/)

Htemperatura għolja:

It-temperatura għolja hija wkoll mezz komuni ta 'denaturazzjoni tal-proteini.

Diethylpyrocarbonate (DEPC):

DEPC huwa inibitur ta 'RNase qawwi iżda mhux komplut, li jista' jinibixxi l-attività ta 'RNase billi jikkombina maċ-ċirku imidazole ta' l-aċidu amminiku tal-grupp attiv RNase biex jiddenatura proteini.

Vanadyl ribonukleoside kumpless:

Kumpless iffurmat minn joni tal-ossidu tal-vanadju u nukleosidi, li jingħaqad ma 'RNase fil-forma ta' sustanzi ta 'tranżizzjoni, li jistgħu jinibixxu kważi kompletament l-attività ta' RNase

oħrajn:

SDS, urea, earth diatomaceous, eċċ għandhom ukoll ċertu effett inibitorju fuq RNase.

Reviżjonijiet Esperti

Li Yujie Tekniku Kap

Direttur tad-Dipartiment tal-Laboratorju, l-Isptar Jiaozhou, l-Isptar Dongfang Affiljat mal-Università ta 'Tongji

Sabiex tiġi evitata l-bijodegradazzjoni ta 'RNase eżoġenu, maskri, ingwanti u kpiepel għandhom jintlibsu u jinbidlu ta' spiss matul il-proċess ta 'estrazzjoni ta' RNA.L-oġġetti tal-ħġieġ kollha għandhom ikunu moħmija f'forn tat-tnixxif f'200°C għal aktar minn sagħtejn.Materjali użati għall-ħami, bħall-plastik, jeħtieġ li jiġu ttrattati bl-ilma DEPC, u mbagħad maħsula b'ilma distillat.Ir-reaġenti jew l-apparati użati għall-estrazzjoni, il-preservazzjoni u l-identifikazzjoni tal-RNA għandhom ikunu ddedikati għall-RNA, u għandha titwaqqaf żona indipendenti tal-operat tal-RNA.

referenzi:

[1] Smith-Vaughan HC, Binks MJ, Beissbarth J, et al.Batterji u viruses fin-nażofarinġi immedjatament qabel il-bidu ta' infezzjonijiet akuti tan-nifs t'isfel fi tfal Indiġeni Awstraljani[J].Eur J Clin Microbiol Infect Dis,2018,37 (9): 1785-1794.

[2] Fergħa tal-Kontroll tal-Infezzjonijiet tal-Isptar tal-Assoċjazzjoni Ċiniża tal-Mediċina Preventiva.Linji gwida għall-ġbir u l-ispezzjoni ta' kampjuni mikrobiċi kliniċi [J].Ġurnal Ċiniż ta 'infezzjoni fl-Isptar, 2018(20):3192-3200.

[3] "Volum tat-Test tal-Bijoloġija Molekulari tat-Test Klinika Għaxar Elef Għaliex"