Gwida għall-Analiżi tal-Problema

The following is an analysis of the problems that may be encountered in the extraction of plant genomic DNA, hoping to be helpful to your experiments. In addition, for other experimental or technical problems other than operation instructions and problem analysis, we have dedicated technical support to help you. If you have any needs, please contact us: 028-83360257 or E-mali: Tech@foregene.com.

Rendiment baxx jew ebda DNA

Normalment ikun hemm ħafna fatturi li jaffettwaw ir-rendiment tad-DNA ġenomika, inkluż is-sors tal-kampjun, l-età tal-kampjun, il-kundizzjonijiet tal-ħażna tal-kampjun, u l-operazzjoni.

Id-DNA ġenomika ma setgħetx tinkiseb waqt l-estrazzjoni

1. Il-kampjuni tat-tessut huma maħżuna jew maħżuna ħażin għal żmien twil wisq, li jirriżulta fid-degradazzjoni tad-DNA ġenomika.

Rakkomandazzjoni: Aħżen kampjuni tat-tessuti f'nitroġenu likwidu jew -20°C;ipprova uża kampjuni miġbura ġodda għall-estrazzjoni tad-DNA ġenomika.

2. Ammont żgħir wisq tal-kampjun jista 'jikkawża li d-DNA ġenomika korrispondenti ma jiġix estratt.

Suġġeriment: Għal kampjuni ta 'tessut li ġew maħżuna għal żmien twil jew li għandhom degradazzjoni severa tad-DNA ġenomika, l-ammont ta' kampjuni ta 'tessut jista' jiżdied b'mod xieraq sabiex jiġi estratt DNA ġenomika konsiderevoli.L-ammont tal-kampjun jista 'jiġi determinat skond il-ħtiġijiet tad-DNA, iżda l-kampjun frisk m'għandux jaqbeż 100mg, u l-kampjun niexef m'għandux jaqbeż it-30mg.

3. Il-kampjun mhuwiex mitħun b'nitroġenu likwidu jew imqiegħed għal żmien twil wisq wara n-nitroġenu likwidu.

Suġġeriment: Waqt l-estrazzjoni tad-DNA, il-kampjun jeħtieġ li jkun mitħun kompletament b'nitroġenu likwidu biex jikser il-ħajt taċ-ċellula;wara tħin, jekk jogħġbok ittrasferixxi t-trab tal-kampjun għal PL1 imsaħħan minn qabel f'65°C kemm jista 'jkun malajr (ladarba t-trab mitħun jiġi mdewweb, id-DNA ġenomika tibda tiddegrada malajr).

4. Ħżin mhux xieraq ta 'Foregene Protease jirriżulta f'attività mnaqqsa jew inattivata.

Rakkomandazzjoni: Ikkonferma l-kundizzjonijiet tal-ħażna ta 'Foregene Protease jew ibdelha b'Foregene Protease ġdid għall-idroliżi enżimatika.

5. Il-kit huwa maħżun jew maħżun b'mod mhux xieraq għal żmien twil wisq, u jikkawża li xi komponenti fil-kit ifallu.

Rakkomandazzjoni: Ixtri kit ġdid għall-estrazzjoni tad-DNA ġenomika tal-pjanti għal operazzjonijiet relatati.

6. Użu mhux xieraq tal-kit.

Suġġeriment: Ixtri Kit għall-Iżolament tad-DNA tal-Pjanti ddedikat għal kampjuni għall-estrazzjoni u l-purifikazzjoni tad-DNA ġenomika tal-pjanti.

7. Buffer WB mingħajr ma żżid anidruż etanol.

Rakkomandazzjoni: Kun żgur li żżid il-volum korrett ta' etanol assolut ma' Buffer WB.

8. L-eluwent ma kienx imqattar fuq il-membrana tas-silika b'mod korrett.

Suġġeriment: Żid l-eluwent imsaħħan minn qabel f'65℃qatra lejn in-nofs tal-membrana tal-ġel tas-silika, u ħalliha f'temperatura tal-kamra għal 5 minuti biex iżżid l-effiċjenza tal-elużjoni.

Estrazzjoni biex tinkiseb DNA ġenomika b'rendiment baxx

1. Il-kampjun huwa maħżun jew maħżun b'mod mhux xieraq għal żmien twil wisq, li jirriżulta fid-degradazzjoni tad-DNA ġenomika.

Rakkomandazzjoni: Aħżen kampjuni tat-tessuti f'-20℃;ipprova uża kampjuni tat-tessuti miġbura ġodda għall-estrazzjoni tad-DNA ġenomika.

2. Jekk l-ammont ta 'kampjuni tat-tessut huwa żgħir wisq, id-DNA ġenomika estratta tkun inqas.

Suġġeriment: Xi kampjuni tal-pjanti huma sinjuri fl-ilma, bħal pjanti akkwatiċi bħall-alka, eċċ., Id-dożaġġ jista 'jiżdied b'mod xieraq jew l-ilma jista' jiġi deidrat ftit qabel l-operazzjoni.

3. Il-kampjuni ma kinux mitħun sewwa bin-nitroġenu likwidu jew tħallew f'temperatura tal-kamra għal żmien twil wisq wara t-tħin.

Suġġeriment: It-tħin tan-nitroġenu likwidu għandu jkun biżżejjed, u l-ħajt taċ-ċellula tal-kampjun għandu jitkisser kemm jista 'jkun;immedjatament wara t-tħin, it-trab tal-kampjun għandu jiġi trasferit għal 65℃Buffer PL1 imsaħħan minn qabel għall-pass li jmiss.

4. Mhux tuża l-kit korrett.

Rakkomandazzjoni: Uża Kit ta 'Iżolament tad-DNA tal-Pjanti dedikat biex tiġbed u tippurifika d-DNA ġenomika tal-pjanti.

5. Ħżin mhux xieraq ta 'Foregene Protease jirriżulta f'attività mnaqqsa jew inattivata.

Rakkomandazzjoni: Ikkonferma l-kundizzjonijiet tal-ħażna ta 'Foregene Protease jew ibdelha b'Foregene Protease ġdid għall-idroliżi enżimatika.

6. Problema tal-eluent

Rakkomandazzjoni: Jekk jogħġbok uża Buffer EB għall-elużjoni;jekk tuża ddH₂O jew elwenti oħra, kun żgur li l-pH tal-eluwent ikun bejn 7.0-8.5.

7. L-eluwent ma jitqattarx b'mod korrett

Suġġeriment: Jekk jogħġbok żid il-qatra ta 'l-elużjoni fin-nofs tal-membrana tas-silika u ħalliha f'temperatura tal-kamra għal 5 minuti biex iżżid l-effiċjenza ta' l-elużjoni.

8. Il-volum tal-eluwent huwa żgħir wisq

Suġġeriment: Jekk jogħġbok uża l-eluwent għall-eluzzjoni tad-DNA ġenomika skont l-istruzzjonijiet, mill-inqas mhux inqas minn 100μl.

DNA ġenomika estratt b'purità baxxa

Il-purità baxxa tad-DNA ġenomika se twassal għall-falliment jew l-effett fqir ta 'esperimenti downstream, bħal: l-enzima ma tistax tinqata', u l-framment tal-ġene fil-mira ma jistax jinkiseb permezz tal-PCR.

1. Kontaminazzjoni ta 'proteini mixxellanji, kontaminazzjoni RNA.

Analiżi: Buffer PW ma ntużax biex taħsel il-kolonna;Il-buffer PW ma ntużax biex taħsel il-kolonna bil-veloċità korretta taċ-ċentrifugazzjoni.

Suġġeriment: ipprova jiżgura li ma jkunx hemm preċipitazzjoni fis-supernatant meta s-supernatant jgħaddi mill-kolonna;kun żgur li taħsel il-kolonna tal-purifikazzjoni bil-Buffer PW skont l-istruzzjonijiet, u dan il-pass ma jistax jitħalla barra.

2. Tniġġis ta 'jone ta' impurità.

Analiżi: Il-kolonna tal-ħasil tal-Buffer WB tħalliet barra jew inħaslet darba biss, li rriżultat f'kontaminazzjoni jonika residwa.

Rakkomandazzjoni: Kun żgur li taħsel darbtejn b'Buffer WB skont l-istruzzjonijiet biex tneħħi l-joni residwi kemm jista 'jkun.

3. Kontaminazzjoni RNase.

Analiżi: RNase Exogenous huwa miżjud mal-Buffer;operazzjoni ta 'ħasil mhux korretta f'Buffer PW se tirriżulta f'RNase residwu u taffettwa operazzjonijiet sperimentali ta' RNA downstream, bħal traskrizzjoni in vitro.

Suġġeriment: Kits ta 'estrazzjoni ta' aċidu nuklejku tas-serje Foregene jistgħu jneħħu RNA mingħajr RNase addizzjonali, u r-reaġenti kollha fil-Kit ta 'Iżolament tad-DNA tal-Pjanti m'għandhomx bżonn RNase;kun żgur li taħsel il-kolonna tal-purifikazzjoni bil-Buffer PW skont l-istruzzjonijiet, u dan il-pass ma jistax jitħalla barra.

4. Residwi tal-etanol.

Analiżi: Wara l-ħasil tal-kolonna tal-purifikazzjoni b'Buffer WB, ma saret l-ebda ċentrifugazzjoni ta 'tubu vojt.

Rakkomandazzjoni: Segwi l-istruzzjonijiet għal ċentrifugazzjoni xierqa tat-tubu vojt.

Manwal ta' Istruzzjoni:

Manwal ta' Istruzzjoni tal-Kit tal-Iżolament tad-DNA tal-Pjanti