Il-metodi tal-PCR u l-kontaminazzjoni tal-ajrusol tal-aċidu nuklejku fil-laboratorji tal-ittestjar tal-aċidu nuklejku huma bħal żewġ naħat ta 'munita.Nistgħu nagħżlu biss li jkollna jew le, imma ma nistgħux nagħżlu jekk irridux jew nonfquh.

1. Screening ta 'tneħħija tad-DNA

Biex tinkiseb it-tneħħija spazjali tal-kontaminazzjoni tal-ajrusol tal-aċidu nuklejku, l-ewwel huwa meħtieġ li jiġu skrinjati dawk li jneħħu d-DNA li jistgħu jneħħu l-aċidi nuklejċi fi stat likwidu.Għax ma tantx hemm dawk li jneħħu d-DNA li verament jaħdmu.Għall-metodu sperimentali, jekk jogħġbok irreferi għal: remover tad-DNA ma jistax ikun "rokna sigrieta" tal-laboratorju!

F'dan l-esperiment, 100 kopja / μL (CT bejn wieħed u ieħor 31) ta 'plasmid ASFV u remover tad-DNA kkwantifikati minn PCR diġitali tħalltu f'volumi ugwali, u mbagħad irreaġixxew f'temperatura tal-kamra għal 10min, 20min u 30min rispettivament.Wara l-estrazzjoni tal-aċidu nuklejku, twettqet l-amplifikazzjoni tal-qPCR.Tqabbel kontroll pożittiv imħallat ma' plasmid u ilma.Peress li l-esperiment ma tlestiex fl-istess ħin, jista 'jkun hemm ċerta devjazzjoni bejn ir-riżultati, iżda ma taffettwax il-konklużjoni tal-esperiment.S'issa, evalwajt 10 prodotti kummerċjali li jneħħu d-DNA.Il-prodotti Nru 1, Nru 6 u Nru 8 biss jistgħu jiddegradaw id-DNA tal-plasmid b'mod effettiv fi stat likwidu.Prodotti oħra m'għandhom kważi l-ebda effett.

Tabella 1 Effett tat-tneħħija ta' l-aċidu nuklejku ta' remover tad-DNA disponibbli kummerċjalment

2. L-esperiment tal-effett tat-tneħħija tad-DNA ta 'diżinfettanti użati b'mod komuni

1. Screening ta 'diżinfettanti użati b'mod komuni

Hemm ħafna tipi ta 'diżinfettanti komunement użati fil-laboratorji: aldeidi, fenoli, alkoħol, imluħa ta' l-ammonju kwaternarju, perossidi, preparazzjonijiet tal-kloru, u aċidi u bażijiet.L-effetti tad-diżinfezzjoni ta 'dawn id-diżinfettanti fuq il-mikro-organiżmi ġew verifikati bis-sħiħ b'esperimenti, iżda M'hemm l-ebda dejta sperimentali suffiċjenti dwar l-effett tad-degradazzjoni tal-aċidi nuklejċi.Il-laboratorji tal-ittestjar tal-aċidu nuklejku jeħtieġu diżinfettant li mhux biss ikollu effett tajjeb ta 'diżinfezzjoni fuq il-mikro-organiżmi, iżda wkoll jista' jiddegrada d-DNA.Ir-riżultati tat-test juru li żewġ preparazzjonijiet tal-kloru biss ta '84 diżinfettant u aċidu trichloroisocyanuric u aċidu idrokloriku 1 M jissodisfaw ir-rekwiżiti.Peress li l-aċidu idrokloriku 1 M huwa korrużiv ħafna, huwa rakkomandat li l-preparazzjonijiet tal-kloru jintużaw bħala rimi tal-iskart fil-laboratorji tal-ittestjar tal-aċidu nuklejku.Madankollu, il-preparazzjonijiet tal-kloru huma korrużivi għall-metalli u ma jistgħux jintużaw għad-diżinfezzjoni ta 'strumenti u tagħmir.

Tabella 2 Effetti tat-tneħħija tad-DNA ta 'tipi differenti ta' diżinfettanti

2. Il-konċentrazzjoni effettiva minima tal-preparazzjonijiet tal-kloru

Id-diżinfettanti bbażati fuq il-kloru għandhom effett qawwi ta 'degradazzjoni tad-DNA, iżda minħabba l-korrużività u l-irritazzjoni tal-metall tagħhom, jistgħu jintużaw biex jitnaddfu l-art, countertops mhux tal-metall, ponot għat-tixrib, tubi ċentrifugi u oġġetti oħra tat-test.

Skont il- "Linji Gwida Tekniċi tad-Diżinfettazzjoni tal-Epidemija tal-Pnewmonja Koronarja Ġdida": Pollutanti (demm, tnixxijiet u rimettar tal-pazjenti) diżinfettant li fih klorin disponibbli 5g/L-10g/L;artijiet, ħitan, u uċuħ tal-oġġetti jużaw klorin disponibbli 1g/L Disinfettant tal-kloru: ħwejjeġ, friex u tessuti oħra huma l-ewwel mxarrba f'diżinfettant tal-kloru b'0.5g/L klorin disponibbli għal 30 minuta, u mbagħad imnaddfa bħas-soltu.

Tabella 3 Effett tat-tneħħija tad-DNA ta 'konċentrazzjonijiet differenti ta' diżinfettant tal-kloru

Ir-riżultati tat-test juru li: meta l-konċentrazzjoni effettiva tal-kloru tkun akbar minn jew ugwali għal 1.2 g/L, id-diżinfettant li fih il-kloru jista 'jiddegrada kompletament 100 kopja/μL plasmid meta jintuża għal 5 minuti.Meta taġixxi għal 10 minuti, 84 diżinfettant b'konċentrazzjoni effettiva ta 'klorin akbar minn jew ugwali għal 0.6 g/L jista' jiddegrada kompletament 100 kopja/μL ta' plasmidi.

3. Esperiment ta 'tneħħija ta' l-arja mniġġes minn aerosol ta 'aċidu nuklejku

Kif tnaddaf l-arja mniġġsa mill-aerosols tal-aċidu nuklejku?Ħafna mill-ħsibijiet huma li jinħoloq ambjent ikkontaminat bl-ajrusol u mbagħad inaddfu, jew biex jitnaddfu l-aċidi nuklejċi wara l-kontaminazzjoni.Għalija, esperiment li ma jistax jiġi ripetut u r-riżultati tal-esperiment ma jistgħux jiġu analizzati b'mod kwantitattiv huwa bla sens, għalhekk ssellef xi metodi ta 'diżinfezzjoni tal-arja diżinfettant.Ara "GB27948-2020 Rekwiżiti Ġenerali għad-Disinfettanti tal-Arja" u "Speċifikazzjonijiet Tekniċi tad-Diżinfettar"

1. Materjali tat-test

1.1 Remover tad-DNA: F'dan l-esperiment, ġew magħżula żewġ removers tad-DNA disponibbli kummerċjalment 6 u 8 fit-Tabella 1.

1.2 Plasmid tat-test: Meta wieħed iqis li l-valur CT tal-biċċa l-kbira tat-tniġġis tal-laboratorju se jkun ogħla minn 30, il-konċentrazzjoni tal-plasmid tal-ġene ASFV użata din id-darba hija ta 'madwar 100 kopja/μL, u l-PCR kwantitattiv fluworexxenti CT huwa ta' madwar 31.07.Żid il-plasmid mat-tampun tal-qoton flocking u nixxef bl-arja.

1.3 Strument tat-test: L-istrument tad-diżinfezzjoni Bilingkehan KVBOX, li huwa ġentilment appoġġjat minn Shenzhen Runlian Environmental Technology Co., Ltd., għandu prestazzjoni eċċellenti ta 'diżinfezzjoni tal-arja b'diżinfettant tal-perossidu tal-idroġenu, u jista' joqtol b'mod effettiv spori u mikro-organiżmi oħra.

1.4 Spazju tat-test: tieqa ta 'trasferiment magħluqa ta' madwar 0.1 metri kubi.

2. Metodu tat-test

L-ammont ta 'diżinfettant issettjat fuq il-magna tad-diżinfezzjoni huwa 10ml, u l-konċentrazzjoni hija 100ml/m3, li hija ħafna ogħla minn "GB27948-2020 Rekwiżiti Ġenerali għal Disinfettanti tal-Arja": meta tuża diżinfettar bl-isprej tal-ajrusol, l-ammont ta' diżinfettant għandu jkun ≤10 ml/m3