L-ittestjar tal-laboratorju jibda bil-ġbir tal-kampjuni, u l-ġbir tal-kampjuni huwa l-eħfef li wieħed jinjora.L-iktar ħaġa importanti għall-ġbir tal-kampjuni hija li tagħżel it-tip ta 'kampjun korrett, tuża għodod xierqa ta' teħid ta 'kampjuni, u twettaq trasport u pproċessar raġonevoli.

I.Tip ta' kampjun

Tipi ta' kampjuni komuni huma kif ġej:

Il-metodu tat-teħid ta’ kampjuni jista’ jirreferi għall-ispeċifikazzjonijiet tekniċi għall-monitoraġġ ambjentali tal-koronavirus il-ġdid fis-suq tal-kummerċ agrikolu (bazaar)”:

1. Kampjuni ta 'tampuni minn tampuni tal-griżmejn, idejn, ħwejjeġ u oġġetti oħra ta' prattikanti: huwa meħtieġ li tuża s-soluzzjoni tal-preservazzjoni tal-virus fit-tubu tat-teħid tal-kampjuni tal-virus u tinfiltra bis-sħiħ it-tampuni tal-qoton tal-kampjun.Il-wiċċ ta 'l-art) jiġi applikat ripetutament u mlaħalħa għal aktar minn 3 darbiet.Fl-istess ħin, huwa meħtieġ li jitwettaq kampjunar imqassam b'ħafna punti fuq il-wiċċ tal-oġġett kampjun.

2. Kampjuni tat-tampuni tal-wiċċ tal-ikel: Il-kampjuni tal-ikel ma jistgħux jinġabru direttament.L-ikel li għandu jinġabar għandu jiġi separat b'attenzjoni u maħżun f'borża ta 'kampjuni nadifa qabel ma jinġabru kampjuni tat-tampuni.Huwa meħtieġ li tuża s-soluzzjoni tal-preservazzjoni tal-virus fit-tubu tat-teħid tal-kampjuni tal-virus, wara li tixxarrab bis-sħiħ it-tampun tal-qoton tat-teħid tal-kampjuni, biex ripetutament smear u laħlaħ il-wiċċ tal-kampjun tal-ikel li għandu jinġabar aktar minn 3 darbiet.Fl-istess ħin, huwa meħtieġ li jitwettaq kampjunar distribwit b'ħafna punti fuq il-wiċċ tal-kampjun.

3. Kampjuni tad-drenaġġ: Skont id-distribuzzjoni tas-sistema tad-drenaġġ fis-suq, agħżel 2-3 postijiet ta 'kampjuni tad-drenaġġ, li jiffokaw fuq il-ġbir tan-netwerk tal-pajpijiet interni, l-downstream tad-direzzjoni tal-fluss tal-ilma, jew il-konnessjoni man-netwerk tal-pajpijiet muniċipali.Biex tiġbor kampjun tat-tampuni, daħħalha fid-drenaġġ b'tampun tal-qoton tal-kampjuni biex jassorbi d-drenaġġ u laħlaħ fit-tubu tal-kampjuni aktar minn 3 darbiet.Biex tiġbor kampjuni tad-drenaġġ, uża fliexken tal-plastik tal-polyethylene biex tiġbor kampjuni ta 'ilma tad-drenaġġ ta' 30-500 mL;għall-ġbir tad-drenaġġ b'volum akbar minn 500 mL, jista 'jintuża bramel tal-plastik tal-polyethylene jew tagħmir speċjali ta' arrikkiment tal-kampjun tal-ilma fuq il-post.Fl-istess ħin, huwa meħtieġ li jsir kampjunar imqassam b'ħafna punti għall-post tat-teħid tal-kampjuni tad-drenaġġ.

4. Kampjuni ta 'annimali: Għal annimali ħajjin, kampjuni ta' kampjuni jistgħu jintużaw biex jiġbru tampuni tal-wiċċ tal-ġisem, tampuni orofarinġi u tampuni anali, u kampjuni ta 'ħmieġ jew sekrezzjoni jistgħu wkoll jinġabru u jiġu rreġistrati kif xieraq fuq il-folja ta' reġistrazzjoni.Għal kampjuni tal-annimali li jkunu għaddew minn tqaxxir, eċċ., Uża tampuni tal-qoton biex tiġbor il-kampjuni tal-wiċċ tal-ġisem u tal-kavità tal-ġisem tagħhom.Huwa meħtieġ li tuża s-soluzzjoni tal-preservazzjoni tal-virus fit-tubu tat-teħid tal-kampjuni tal-virus biex tinfiltra bis-sħiħ it-tampun tal-qoton tal-kampjun, u mbagħad irrepeti l-applikazzjoni tal-wiċċ tal-kampjun tal-ikel li għandu jinġabar.Shabu aktar minn 3 darbiet.Fl-istess ħin, huwa meħtieġ li jitwettaq kampjunar distribwit b'ħafna punti fuq il-wiċċ tal-kampjun.

5. Apparat ieħor: kontenituri għat-trasport u t-trobbija ta 'annimali bħal gaġeġ jew tankijiet tal-ħut.L-ewwel, osserva jew tifhem it-tipi speċifiċi ta 'annimali maħżuna u mrobbija fil-kontenitur, u iġbor kampjuni ta' swab fuq il-ħajt ta 'ġewwa tal-kontenitur jew kampjuni likwidi tal-kontenut.

6.Iġbor kampjuni tal-ajrusol f'żoni fejn jinġabru n-nies, żoni tal-kummerċ lokali ventilati ħażin, uffiċċji, u kmamar tal-mistrieħ.

II.Għodod ta' teħid ta' kampjuni
1. Tubu tal-ġbir tad-demm
Jekk għandek bżonn tagħmel testijiet ta 'aċidu nuklejku u kampjuni ta' antikoagulanti aktar tard, huwa rakkomandat li tuża bastiment tad-demm vakwu li jkun fih antikoagulant EDTA biex tiġbor id-demm;għall-kampjuni tas-serum, huwa rakkomandat li tuża bastiment tad-demm vakwu mingħajr antikoagulant.

2. Tampun tal-kampjun

Huwa rakkomandat li tuża tampuni tal-polipropilene minflok tampuni tal-alġinat tal-kalċju jew tampuni b'arbli tal-injam, minħabba li jista 'jkun fihom sustanzi li jinattivaw ċerti viruses u jinibixxu l-ittestjar tal-PCR.Tampuni bl-irjus tal-qoton ma jistgħux jintużaw, minħabba li l-fibri tal-qoton għandhom assorbiment qawwi ta 'proteini u mhumiex faċilment elużi fis-soluzzjoni ta' preservazzjoni sussegwenti.

Fl-"Speċifikazzjonijiet Tekniċi għal Ġbir Imħallat 10-in-1 u Sejbien ta 'Aċidi Nukleiċi Ġodda tal-Coronavirus", huwa stipulat b'mod ċar li "it-tampun tal-kampjun għandu jkun magħmul minn poliester, najlon u materjali oħra mhux tal-qoton u mhux tal-kalċju alġinat, u l-manku għandu jkun magħmul minn materjal mhux tal-injam.Il-punt tat-tkissir huwa madwar 3 ċm mill-parti ta’ fuq tar-ras tat-tampuni, li huwa faċli biex tinkiser.”

Is-CDC fl-Istati Uniti semma wkoll “Uża biss tampuni tal-fibra sintetika bi xaftijiet tal-plastik jew tal-wajer.Tużax tampuni tal-alġinat tal-kalċju jew tampuni b'xaftijiet tal-injam,peress li jista' jkun fihom sustanzi li jinattivaw xi viruses u jinibixxu l-ittestjar tal-PCR.

Bħalissa użat ħafna huwa swab ta 'flocking tan-najlon sterili li jintremew flimkien ma' virga tal-plastik.Il-flocking swab għandu assorbiment aħjar ta 'ilma u rata ta' rilaxx.Skont siti differenti ta 'teħid ta' kampjuni, ir-ras tat-tampuni għandha wkoll daqsijiet u fibri differenti.Il-ħxuna.”

3. Kampjun ta 'soluzzjoni ta' preservazzjoni tat-trasport

Soluzzjoni ta 'preservazzjoni ta' inattivazzjoni tal-virus: ammont xieraq ta 'konċentrazzjoni ta' melħ ta 'guanidine u varjetà ta' komponenti ta 'liżi tal-virus jistgħu lyse direttament il-virus biex jirrilaxxaw l-aċidu nuklejku, inattivaw RNase u DNase, u jiżguraw l-integrità ta' aċidu nuklejku, li jista 'jintuża għal kxif ta' qPCR sussegwenti.Ma jistax jintuża għall-kultivazzjoni u l-iżolament tal-virus.

Soluzzjoni ta 'trasport u preservazzjoni tal-virus: fiha melħ, aċidi amminiċi, vitamini, glukożju u proteini meħtieġa għas-sopravivenza tal-virus, li jistgħu jżommu l-attività tal-virus.Jista 'jintuża għall-estrazzjoni tal-aċidu nuklejku u l-iskoperta tal-virus fil-futur, u jista' jintuża wkoll għall-kultivazzjoni u s-separazzjoni tal-virus.

4. Tubu tal-preservazzjoni tal-kampjun u borża tal-kampjun

It-tubu tal-ħażna tal-kampjun għandu jkun tubu tal-plastik sterili b'tapp bil-kamin li ma jassorbix l-aċidu nuklejku.Kull tubu tal-kampjun għandu jkun mgħotti b'borża tal-kampjun biex jipprevjeni t-tnixxija u l-kontaminazzjoni tal-kampjun.

III.Sustanzi li jinterferixxu fil-kampjun

Sustanzi li jinterferixxu fl-esperimenti PCR

1. interferenti endoġenu

Sustanzi preżenti fil-kampjun tal-ġisem jistgħu jinterferixxu mal-iskoperta ta 'sustanzi oħra.

Demm:heme (> 1mg / ml), hemin (> 0.1ng / μl), trigliċeridi, IgG, eċċ.;

Awrina:Urea (20mM);

Ippurgar:polisakkaridi tal-pjanti, kolat;

Tessut:protease, kollaġen;

Ħalib: protease, jone tal-kalċju;

Drogi: antibijotiċi, mediċini antivirali, ormoni, eċċ.

oħra.

2. interferent eżoġenu

Jiġi minn sustanzi li jistgħu jinterferixxu mal-iskoperta ta 'sustanzi oħra in vitro.Addittivi tal-kampjuni u sustanzi li jistgħu jiġu kkuntattjati waqt il-ġbir u l-ipproċessar tal-kampjuni:

Provvisti tat-test: ġel tas-separazzjoni tas-serum, kontenitur tal-ġbir tal-kampjuni u tapp tal-gomma, kateter, fluwidu tal-flushing tal-kateter, trab tal-ingwanti, eċċ.

Antikoagulant: eparina (> 0.1 U/mL), EDTA (> 0.5 mM), eċċ.;

Solventi organiċi: isopropanol (> 0.1 IU/ml), betaine, dimethyl sulfoxide, formamide, glycerin, PEG, eċċ.;

Diżinfettanti: alkoħol (etanol> 1%), aldeidi, fenoli (fenol> 0.2%), perossidi, aċidi qawwija (HCL), alkali qawwija (NaOH), eċċ.;

Deterġenti:SDS (>0.005%);

Ħamrija: Humus

Żebgħa: Indigo

oħra.

Taħt kundizzjonijiet attwali ta 'kampjunar ta' barra, bħall-ġbir ta 'kampjuni ambjentali, il-kampjuni jista' jkun fihom varjetà ta 'sustanzi li jinterferixxu, u l-kompożizzjoni ta' sustanzi li jinterferixxu f'kull post hija differenti, li teħtieġ li jsiru esperimenti ta 'interferenza tal-PCR skont il-kundizzjonijiet lokali.

IV.Kondizzjonijiet ta 'ħażna u trasport tal-kampjun

Kampjuni kliniċi miġbura friska għandhom jintbagħtu lil-laboratorju fi żmien sagħtejn sa 4 sigħat wara l-ġbir f'2°C sa 8°C.Aħżen f'4℃ fi żmien 24 siegħa.Il-kampjuni użati għall-iżolament tal-virus u l-iskoperta tal-aċidu nuklejku għandhom jiġu ttestjati mill-aktar fis possibbli.Kampjuni li jistgħu jiġu ttestjati fi żmien 24 siegħa jistgħu jinħażnu f'4°C;kampjuni li ma jistgħux jinstabu fi żmien 24 siegħa għandhom jinħażnu f'-70°C jew inqas (jekk le- Aħżen f'70°C fi friġġ f'-20°C).

Sommarju:Il-ġbir, it-trasport u l-ħażna standardizzati tal-kampjuni huma essenzjali għall-ittestjar sussegwenti.In-negattivi foloz ta 'ħafna testijiet tal-laboratorju huma kkawżati minn ġbir mhux xieraq, trasport u ħażna ta' kampjuni li jwasslu għal degradazzjoni ta 'aċidu nuklejku virali.Madankollu, ħafna laboratorji għadhom jinjoraw l-importanza tat-teħid tal-kampjuni.Nittama li dan l-artikolu jista 'jqajjem l-attenzjoni ta' kulħadd għat-teħid ta 'kampjuni u jagħmel kampjunar aktar xjentifiku u raġonevoli!

Prodott relatat:

Kit ta' Sejbien ta' Aċidu Nukleiku Varjanti SARS-CoV-2 (I) (Metodu ta' Sonda Fluworexxenti Multiplex PCR) - Għall-Individwazzjoni ta' Mutanti Mill-Brażil, l-Afrika t'Isfel, U r-Renju Unit