• facebook
  • linkedin
  • youtube

Kemm taf

Dwar Nestrazzjoni ta 'aċidu uklejku

Il-bidu u t-tmiem ta 'aċidu nuklejku purifikat

Kollox huwa diffiċli fil-bidu, l-aċidu nuklejku purifikat huwa l-aktar

Bidu ta' esperimenti molekulari, għal esperimenti sussegwenti

Is-suċċess jew il-falliment għandu impatt kruċjali.

L-ispettrofotometru UV ta 'traċċa/ultra-traċċa huwa favorit minn ħafna riċerkaturi xjentifiċi minħabba li jista' jiskopri konċentrazzjoni ta 'aċidu nuklejku u residwi ta' proteini u joni tal-melħ sempliċiment, malajr u ekonomikament.

Kif nafu lkoll, A260 tfisser valur OD ta 'assorbiment ta' aċidu nuklejku, A280 tfisser valur OD ta 'assorbiment ta' konċentrazzjoni ta 'proteini, A230 tfisser valur OD ta' assorbiment ta 'jone tal-melħ, għalhekk A260 jista' jikkonverti konċentrazzjoni ta 'aċidu nuklejku, A260/280 ifisser residwu ta' proteina, A260/230 tfisser residwu ta 'jone tal-melħ, iżda dan huwa biss miżura ta' regola bbażata fuq numru kbir.konvenzjonali” biex jemmen li jista 'jispjega l-purità tad-DNA u RNA għalsa ċertu punt.Mhuwiex l-uniku standard għall-identifikazzjoni tar-rendiment u l-purità tal-aċidu nuklejku, jintuża biss bħala referenza, u mhuwiex "standard tad-deheb".

derthfd (1)

Il-manwal Thermo Fisher ND-2000 jenfasizza l-affidabbiltà tar-riżultati tat-test

Ir-raġuni hija li r-riżultati miksuba bl-użu ta 'mikro/ultramicro UV spettrofotometru jirriflettu biss ir-rendiment u l-purità ta' aċidu nuklejku mill-ġenb, u hemm ħafna fatturi li jinfluwenzaw (mogħdija ottika, volum tal-kampjun, konċentrazzjoni tal-kampjun, valur pH, joni oħra li jaffettwaw il-kejl tal-assorbiment, eċċ.), Il-valur OD imkejjel mhuwiex neċessarjament preċiż.Fl-istess ħin, minħabba n-nuqqas ta 'speċifiċità tal-materjal tad-determinazzjoni tal-valur ta' l-assorbiment, DNA single-stranded, DNA double-stranded, RNA, dNTPs, u xi proteini kollha għandhom qċaċet ta 'assorbiment f'wavelength ta' 260nm, u l-konċentrazzjoni determinata minn A260 waħedha mhix neċessarjament id-DNA jew RNA reali.Il-konċentrazzjoni, u l-integrità u d-degradazzjoni tagħha ma jistgħux jiġu ġġudikati.

Allura kif tiġġudika l-kwalità tal-aċidu nuklejku purifikat tagħna?Minbarra l-użu ta 'spettrofotometru UV mikro/ultramikro għall-iskoperta, metodi bħall-elettroforeżi tal-ġel tal-agarose huma meħtieġa wkoll biex juru viżwalment il-purità u l-integrità tal-aċidu nuklejku, u biex jindikaw il-konċentrazzjoni sa ċertu punt.B'dan il-mod, ir-rendiment tal-aċidu nuklejku u l-purità miksuba mir-riżultati ta 'skoperta ta' diversi metodi huma kredibbli.

Paragun tal-mapep sperimentali

derthfd (2)

Id-DNA ġenomika taċ-ċelloli H1299 ġiet estratta bl-użu ta' kits ta' Estrazzjoni tad-DNA tal-kumpanija A, u dehret kontaminazzjoni sinifikanti ta' impurità, li rriżultat f'valuri OD għoljin

(Valur tal-kejl OD u elettroferogramma korrispondenti)

Indiċi ta' valutazzjoni

Hemm "standard tad-deheb" għar-rendiment tal-aċidu nuklejku u l-ittestjar tal-kwalità?

Safejn nafu, m'hemm l-ebda metodu sempliċi, veloċi u rħis.Kemm jekk huwa spettrofotometru, elettroforesi tal-ġel, jew spettrometrija tal-massa, kollha jirriflettu l-konċentrazzjoni u l-purità tal-aċidu nuklejku fis-soluzzjoni minn aspetti differenti, u jeħtieġ li jiġu ġġudikati billi jirreferu għal xulxin.

L-aħjar indiċi ta 'evalwazzjoni huwa dejjeml-applikazzjoni sperimentali ta' segwitu.Ma taffettwax l-effiċjenza tat-traskrizzjoni inversa u l-amplifikazzjoni tal-PCR.Il-ksib ta 'prodotti ta' amplifikazzjoni affidabbli u valuri Ct, u l-kisba ta 'sekwenza kompleta permezz ta' sekwenza hija estrazzjoni ta 'aċidu nuklejku b'suċċess.

Fil-qosor, il-fehma tat-teorija tal-proporzjon biss għandha tiġi kkontestata mill-fehma ta '"l-użu ta' riżultati sperimentali downstream tajbin bħala parametri ta 'estrazzjoni tajbin"!

Kitts Rakkomandati għall-estrazzjoni tal-RNA tad-DNA Foregene biex tinkiseb purità għolja tad-DNA/RNA:

https://www.foreivd.com/reagent/dna-isolation-series/

https://www.foreivd.com/reagent/rna-isolation-series/


Ħin tal-post: Diċ-14-2022