Ċomb

RNA twil li ma jikkodifikax, lncRNA huwa RNA li ma jikkodifikax b'tul akbar minn 200 nukleotidi, ġeneralment bejn 200-100000 nt.lncRNA jirregola l-espressjoni tal-ġeni f'livelli epiġenetiċi, traskrizzjoni u post-traskrizzjoni, u jipparteċipa f'sajlenser tal-kromożomi X, imprinting tal-ġenoma u modifika tal-kromatina, attivazzjoni tat-traskrizzjoni, interferenza tat-traskrizzjoni, trasport nukleari, regolazzjoni taċ-ċiklu taċ-ċelluli, regolamentazzjoni tad-divrenzjar taċ-ċelluli, u effetti ta' kumpens tad-doża (effett ta' kumpens tad-dożaġġ) il-hot spots fil-qasam tal-bijomediċina.

01  Tipi u karatteristiċi ta 'LncRNA

lncRNA huwa maqsum f'ħafna tipi skond is-sorsi differenti tal-formazzjoni tiegħu, kif muri fil-figura ta 'hawn fuq.Għandu l-karatteristiċi li ġejjin:

1. lncRNAs huma ġeneralment itwal, b'espressjoni dinamika u metodi ta 'splicing differenti matul id-divrenzjar
2. Meta mqabbel ma 'ġeni ta' kodifikazzjoni, lncRNA normalment ikollu livell ta 'espressjoni aktar baxx
3. Il-biċċa l-kbira tal-lncRNAs għandhom speċifiċità ovvja tal-espressjoni temporali u spazjali fil-proċess tad-divrenzjar u l-iżvilupp tat-tessuti
4. Hemm espressjonijiet karatteristiċi fit-tumuri u mard ieħor
5. Il-postijiet subċellulari ta 'lncRNA huma diversi
6. Is-sekwenza hija baxxa fil-konservazzjoni, iżda l-funzjoni għandha ċertu grad ta 'konservazzjoni, eċċ.

02 Mistoqsijiet Frekwenti dwar LncRNA Reverse Trascription

Minħabba l-kontenut baxx ta 'lncRNA fiċ-ċelloli, tul twil u struttura ta' livell għoli, RNA bħal dan spiss ikollu strutturi kumplessi bħal loops staminali jew hairpins, u RT-qPCR huwa suxxettibbli għal problemi ta 'traskrizzjoni inversa bla suċċess jew effiċjenza baxxa.

03 Soluzzjoni ta 'traskrizzjoni inversa ta' LncRNA

Fir-regola ċentrali, il-proċess ta 'viruses RNA li jużaw reverse transcriptase tagħhom stess biex jissintetizzaw DNA bl-użu ta' RNA bħala mudell jissejjaħ reverse trascription.Il-proċess ta 'użu ta' reverse transcriptase tal-virus RNA biex jissintetizza template cDNA in vitro jissejjaħ traskrizzjoni inversa.L-elementi ewlenin inklużi fis-sistema ta 'traskrizzjoni inversa: mudell ta' RNA, reverse transcriptase, primers u komponenti oħra.

1.Mudell tal-RNA

L-influwenza tal-mudell tal-RNA fuq it-traskrizzjoni inversa hija riflessa fl-istruttura, il-purità u l-integrità tagħha.Iktar ma tkun għolja l-purità u l-integrità tal-RNA estratt, iktar tkun għolja l-effiċjenza tat-traskrizzjoni inversa u iktar ikunu preċiżi r-riżultati kwantitattivi sussegwenti.L-RNA ppurifikat minn reaġenti ta 'estrazzjoni ta' RNA użati ta 'spiss ikun fih residwi ta' alkoħol u melħ guanidine, li għandhom effett inibitorju qawwi fuq il-biċċa l-kbira tat-traskriptase inversa.

2.Reverse transcriptase

Reverse transcriptase għandha influwenza ewlenija fis-sistema kollha tat-traskrizzjoni inversa.It-temperatura xierqa għar-reverse transcriptase użata fil-biċċa l-kbira tal-laboratorji hija ġeneralment 42°C.Fil-fatt, il-ftuħ tal-istruttura tal-RNA ta 'livell għoli jeħtieġ temperatura ogħla, u r-rekwiżiti għar-reverse transcriptase huma ogħla.

3.Primer

Primers tat-traskrizzjoni inversa jinkludu primers speċifiċi għall-ġeni, primers każwali u primers Oligo dT.Il-biċċa l-kbira tal-lncRNAs ma fihomx dnub polyA, u huwa importanti li tqabbel sew il-primers każwali b'Oligo dT.

4.Komponenti oħra

Fid-dawl tal-fatt li l-RNA huwa partikolarment faċli biex jiddegrada, l-introduzzjoni ta 'komponenti fis-sistema ta' traskrizzjoni inversa tista 'tiġi minimizzata, li tista' effettivament tevita d-dħul ta 'RNase u tiżgura l-progress bla xkiel tat-traskrizzjoni inversa.

Foreġenejikseb minn RNA template, traskrizzjoni inversa għal qPCR

Skorta b'mod komprensiv id-detezzjoni tal-lncRNA tiegħek

Annimali RNA totali IsolazzjoniKit (bil-kolonna għat-tneħħija tal-gDNA)

Ċellula Totali RNA IsolazzjoniKit (bil-kolonna għat-tneħħija tal-gDNA)

Lnc-RT HeroTM I (B'gDNase) (Super Premix għal sinteżi ta' cDNA tal-ewwel linja minn lncRNA)

Real Time PCR EasyTM-SYBR Green I

Avantaġġi ofEstrazzjoni tal-RNA:

Il-kit juża t-teknoloġija tal-estrazzjoni tal-RNA tat-tielet ġenerazzjoni, l-ebda ħtieġa li tuża DNase.

11-il minuta minn 96, 24, 12, u 6-well pjanċa ċelluli kkultivati, estrazzjoni ta 'effiċjenza għolja ta' RNA taċ-ċelluli totali mingħajr gDNA, ta 'purità għolja, ta' kwalità għolja.

Vantaġġi tat-traskrizzjoni inversa tal-lncRNA:

Sistema ta 'traskrizzjoni inversa żviluppata apposta għal LncRNA biex tneħħi malajr il-kontaminazzjoni tad-DNA ġenomika.

Is-sistema ta 'traskrizzjoni inversa għandha stabbiltà termali għolja u għad għandha prestazzjoni tajba ta' traskrizzjoni inversa f'50 ° C.

Mudelli b'kontenut għoli ta 'GC u struttura sekondarja kumplessa jistgħu jitreġġgħu lura b'effiċjenza għolja.

Vantaġġiof qPCR:

Hot start Foregene Taq Polymerase għandu effiċjenza ogħla ta 'amplifikazzjoni, sensittività ogħla ta' amplifikazzjoni, u speċifiċità ogħla ta 'amplifikazzjoni

Il-Real PCR Easy Mix ottimizzat jagħmel SYBR Green I għandu sensittività ogħla ta 'skoperta, u l-intensità ta' fluworexxenza tagħha hija 3-5 darbiet dik ta 'prodotti simili, li jistgħu jissodisfaw il-ħtiġijiet ta' tipi differenti ta 'esperimenti kwantitattivi ta' fluworexxenza.