Bini SOP Systerm

Stabbilixxi SOP tal-esperiment tal-PCR biex tistandardizza l-imġieba tal-persunal tal-esperiment.

L-esperimentaturi josservaw b'mod strett il-proċeduri operattivi, u jimminimizzaw it-tniġġis tal-PCR li jista 'jkun ikkawżat minn fatturi umani jew jipprevjenu l-okkorrenza ta' tniġġis fl-operazzjoni.Barra minn hekk, l-esperimentatur għandu jkollu l-għarfien u l-ħiliet professjonali korrispondenti, inkluża l-profiċjenza fit-tħaddim ta 'tagħmir relatat, li jiċċara l-proċess kollu tax-xogħol, ħakma tal-metodi ta' trattament ta 'kontaminazzjoni u metodi ta' kontroll tal-kwalità tal-laboratorju, u li jkun kapaċi jinterpreta b'mod korrett ir-riżultati tat-test.

Laboratorju PCR Standard tal-Bini

Il-laboratorju tal-PCR huwa maqsum f'erba 'oqsma fil-prinċipju, jiġifieri żona ta' preparazzjoni tar-reaġenti, żona ta 'proċessar tal-kampjun, żona ta' amplifikazzjoni, u żona ta 'analiżi tal-prodott ta' amplifikazzjoni.L-ewwel żewġ żoni huma żoni ta 'pre-amplifikazzjoni, u l-aħħar żewġ żoni huma żoni ta' wara l-amplifikazzjoni.Iż-żona ta 'pre-amplifikazzjoni u ż-żona ta' wara l-amplifikazzjoni għandhom ikunu strettament separati.Materjali sperimentali, reaġenti, karta ta 'reġistrazzjoni, pinen, materjali tat-tindif, eċċ jistgħu biss joħorġu miż-żona ta' qabel l-amplifikazzjoni għaż-żona ta 'wara l-amplifikazzjoni, jiġifieri miż-żona tal-preparazzjoni tar-reaġenti, iż-żona tal-ipproċessar tal-kampjun, iż-żona tal-amplifikazzjoni, u ż-żona tal-analiżi tal-prodott tal-amplifikazzjoni, u m'għandhomx jiċċirkolaw fid-direzzjoni inversa.Il-fluss ta 'l-arja fil-laboratorju għandu wkoll joħroġ miż-żona ta' qabel l-amplifikazzjoni għaż-żona ta 'wara l-amplifikazzjoni, mhux fid-direzzjoni inversa.

Naqqas il-passi sperimentali

Jekk il-laboratorju jwettaq biss skoperta u identifikazzjoni tal-PCR, huwa rakkomandat li tuża PCR kwantitattiv fluworexxenti minflok PCR konvenzjonali.

Ir-riżultati ta 'skoperta ta' PCR kwantitattivi tal-fluworexxenza jistgħu jinġabru u jiġu analizzati b'sinjali fluworexxenti, għalhekk m'hemmx bżonn li tiftaħ l-għatu għall-elettroforeżi wara r-reazzjoni, li tevita l-kontaminazzjoni tal-prodotti tal-PCR ikkawżata mit-tnixxija ta 'prodotti ta' reazzjoni biex jiffurmaw aerosols.Jekk iżżid in-numru ta 'fetħiet ta' għatu matul il-pass tat-tagħbija tal-elettroforeżi tal-ġel, x'aktarx li sseħħ kontaminazzjoni tal-ajrusol.Huwa rakkomandat li tiġi promossa l-applikazzjoni ta 'PCR kwantitattiv u gradwalment tissostitwixxi PCR kwalitattiva.

Tadotta sistema UNG kontra t-tniġġis

Is-sistema ta 'kontaminazzjoni tal-prodott UNG anti-PCR tintuża għar-reazzjoni tal-PCR.

Is-sistema tuża dUTP minflok dTTP.Wara r-reazzjoni tal-PCR, il-prodotti kollha tal-PCR (frammenti tad-DNA) huma inkorporati mad-dUTP;fir-rawnd li jmiss tar-reazzjoni tal-PCR, l-enzima UNG miżjuda mas-sistema hija inkubata f'37 ° C għal 5 minuti qabel il-PCR, li tista 'tkun speċifika Degrada l-frammenti tad-DNA kollha li fihom dUTP, u mbagħad twettaq reazzjoni tal-PCR.Dan jista 'jneħħi kompletament il-kontaminazzjoni tal-ajrusol ikkawżata mill-prodotti tal-PCR.L-effett jidher fil-figura hawn taħt:

Nota: Għas-serje diretta tal-PCR, tista 'tagħżel il-prodotti tas-serje tas-sistema tat-tniġġis tal-prodott kontra l-PCR ta' FJ Biotech

Issuġġerixxi

Għal-laboratorji li jwettqu ttestjar ta 'ġenotipi fuq skala kbira, huwa rakkomandat ħafna li tintuża s-sistema ta' kontaminazzjoni tal-prodott UNG anti-PCR għall-ittestjar tar-reaġenti minbarra l-kostruzzjoni ta 'laboratorji raġonevoli.

Tfakkira: L-użu ta 'din is-sistema ma jistax ineħħi l-kontaminazzjoni tal-prodott PCR li diġà ġiet ikkawżata.Għalhekk, is-sistema UNG għandha tintuża fil-bidu tat-test rilevanti, u s-sistema UNG għandha dejjem tintuża għall-amplifikazzjoni tal-PCR, sabiex tiġi evitata l-kontaminazzjoni tal-prodotti tal-PCR.Pożittiv falz.

Huwa rakkomandat li tuża s-sistema Direct PCR-UNG ta' Forge Biotech meta twettaq testijiet fuq skala kbira, bħal: Plant Leaf Direct PCR Kit-UNG;

Żerriegħa tal-Pjanti Direct PCR Kit-UNG;

Kit PCR Dirett tat-Tessut tal-Annimali-UNG;

Mouse Tail Direct PCR Kit-UNG;

Zebra Fish Direct PCR Kit-UNG.

Din is-serje ta 'kits minn Foregene tista' mhux biss twettaq skoperta tal-PCR malajr u fuq skala kbira, iżda wkoll tipprevjeni u tikkontrolla b'mod effettiv il-kontaminazzjoni tal-prodott tal-PCR.