• facebook
  • linkedin
  • youtube

1: Ibdel il-provvisti sperimentali fil-ħin

aħbarijiet812 (1) 

Stabbilixxi kontroll negattiv (NTC) u rrepetih ħafna drabi.Ladarba jinstab li hemm kontaminazzjoni tal-prodott PCR fil-laboratorju, ibdel il-provvisti sperimentali kollha fil-ħin.Bħal: iddilwixxi mill-ġdid u pprepara l-primers, sterilizza mill-ġdid il-ponta tal-pipetta, tubu EP, ddH2O, eċċ., Ibdel b'pipetta ġdida, u tissellef temporanjament laboratorji oħra biex iwettqu esperimenti PCR.Il-laboratorju kkontaminat għandu jkun ventilat u irradjat b'raġġi ultravjola sakemm il-kontaminazzjoni tal-prodott PCR tiġi eliminata qabel ma tipproċedi bl-esperiment.

2: Estendi l-ħin ta 'espożizzjoni UV

aħbarijiet812 (2)

Ta 'min jinnota li biex titneħħa l-kontaminazzjoni tad-DNA, ir-radjazzjoni ultravjola regolari għandha tiġi estiża b'sagħtejn mis-soltu.Anke hekk, l-effett tal-irradjazzjoni UV fuq it-tneħħija ta 'frammenti żgħar (taħt 200bp) ta' kontaminazzjoni tad-DNA għadu mhux tajjeb.

It-tul ta 'mewġ ultravjola (nm) huwa ġeneralment 254/300nm, u huwa biżżejjed li tirradja għal 30 minuta.Għandu jiġi nnutat li meta tagħżel UV biex telimina l-kontaminazzjoni tal-prodotti tal-PCR residwu, għandhom jiġu kkunsidrati t-tul tal-prodott tal-PCR u d-distribuzzjoni tal-bażijiet fis-sekwenza tal-prodott.L-irradjazzjoni UV hija effettiva biss għal frammenti twal 'il fuq minn 500 bp, u għandha ftit effett fuq frammenti qosra.

Matul l-irradjazzjoni UV, il-bażijiet tal-pirimidini fil-prodott tal-PCR se jiffurmaw dimeri.Dawn id-dimeri jistgħu jtemmu l-estensjoni, iżda mhux il-pirimidini kollha fil-katina tad-DNA jistgħu jiffurmaw dimeri, u l-irradjazzjoni UV tista 'wkoll tkisser id-dimeri..Il-grad ta 'formazzjoni ta' dimer jiddependi fuq il-wavelength UV, it-tip ta 'dimer pyrimidine u s-sekwenza ta' nukleotidi maġenb is-sit tad-dimer.Għalhekk, jekk il-frammenti amplifikati PCR huma żgħar, huwa rakkomandat li tuża s-sistema ta 'kontaminazzjoni tal-prodott UNG anti-PCR.

3:Kenniesi tat-tniġġis tad-DNA użati b'mod komuni

aħbarijiet812 (3)

L-ajrusols huma ġġenerati faċilment meta jiżdiedu l-pipetti, li huwa diffiċli li jiġi evitat, u se joqgħod malajr.Għalhekk, hija bla dubju għażla tajba li ta 'spiss tuża kenniesa speċjali tat-tniġġis tad-DNA biex tevita t-tixrid tat-tniġġis tad-DNA.

4: Uża sistema UNG kontra t-tniġġis

aħbarijiet812 (4)

Wara li titneħħa l-kontaminazzjoni tal-prodott tal-PCR, il-laboratorju tal-ittestjar jista 'juża s-sistema ta' kontaminazzjoni tal-prodott UNG anti-PCR biex jipprevjeni l-kontaminazzjoni tal-prodott tal-PCR.F'laboratorji ġenerali, tista 'twettaq diviżorji sperimentali sempliċi, tissepara b'mod strett iż-żona tal-prodott PCR minn żoni oħra, tistabbilixxi ċerti regoli u regolamenti tal-laboratorju, u twettaq taħriġ rilevanti biex tevita l-okkorrenza ta' kontaminazzjoni tal-prodott PCR.

Rakkomandazzjonijiet: L-istabbiliment ta 'laboratorju PCR raġonevoli, iż-żamma ta' ambjent PCR tajjeb, il-formulazzjoni ta 'proċeduri standard ta' tħaddim tal-PCR, u l-kultivazzjoni tal-kuxjenza operattiva rigoruża tal-esperimentaturi huma ċ-ċwievet biex jipprevjenu jew inaqqsu t-tniġġis tal-esperimenti tal-PCR.


Ħin tal-post: Awissu-12-2021