• facebook
  • linkedin
  • youtube

Tampun buckali/Kit ta' estrazzjoni tad-DNA tal-karta FTA

L-analiżi li ġejja tal-problemi possibbli fiBukkalitajjara/FTA card DNA extraction is helpful to your experiment. In addition, for other experimental or technical problems in addition to operating instructions and problem analysis, we have dedicated technical support to help you. If you have any needs, please contact us at: 028-83360257 or E-mali:Tech@foregene.com.

 

Il-kolonna tal-purifikazzjoni hija misduda

 

 

F'dan il-kit, fl-operazzjoni ta 'estrazzjoni tad-DNA ġenomika, il-kolonna ta' purifikazzjoni hija adsorbita direttament fuq it-taħlita ta 'liżi enżimatika tal-kampjun mingħajr pass ta' ċentrifugazzjoni, u l-kolonna ta 'purifikazzjoni tista' tiġi mblukkata minħabba enżimizzazzjoni mhux kompluta u viskożità għolja tal-kampjun.

Il-kawżi possibbli li ġejjin huma kif ġej:

1. Diġestjoni enżimatika mhux kompluta tal-kampjuni tat-tessut.

Rakkomandazzjoni: Il-ħin tal-ipproċessar tal-kampjun ta' Foregene Protease jista' jiġi estiż b'mod xieraq jew is-supernatant jista' jittieħed wara ċ-ċentrifugazzjoni f'12,000 rpm (~ 13,400× g) għal 5 min.

2. Użu eċċessiv ta 'kampjuni ta' tessuti jew tessuti kbar.

Rakkomandazzjoni: Huwa aħjar li ma taqbiżx 1Bukkali swab fil-kampjun;jekk il-kampjun huwa kbir wisq, żid id-dożaġġ ta 'Buffer ST1, Foregene Protease, buffer ST2 kif xieraq.

3. Il-viskożità tal-kampjun hija għolja wisq.

Rakkomandazzjoni: Il-kampjuni jistgħu jiġu dilwiti b'mod xieraq b'10 mM ta' Tris-HCl qabel l-estrazzjoni tad-DNA ġenomika.

4. Frammenti tal-karta tad-demm ġew miġbuda.

Rakkomandazzjoni: Il-ħin taċ-ċentrifugazzjoni temporanju tal-pass 6 tal-estrazzjoni ġenomika tal-post tad-demm (FTA Card) jista 'jiġi estiż b'mod xieraq.

 

Rendiment baxx jew ebda DNA

 

Ħafna drabi jkun hemm varjetà ta 'fatturi li jaffettwaw ir-rendiment tad-DNA ġenomika, inkluż l-oriġini tal-kampjun, il-kundizzjonijiet tal-ħażna tal-kampjun, il-preparazzjoni tal-kampjun, il-manipulazzjoni, eċċ.

Id-DNA ġenomika ma tistax tinkiseb waqt l-estrazzjoni

Il-kawżi possibbli huma kif ġej:

1. Preservazzjoni mhux xierqa tal-kampjuni jew ħażna għal żmien twil wisq twassal għal degradazzjoni tad-DNA ġenomika.

Rakkomandazzjoni: Tampuni orali għandhom preferibbilment jittieħdu kampjuni friski, u mhux rakkomandabbli li jintużaw tampuni ippreservati għal operazzjonijiet ta 'estrazzjoni tad-DNA ġenomika;kampjuni tal-post tad-demm għandhom jiżguraw li l-kwalità hija kwalifikata u l-ħin tal-ħażna m'għandux ikun twil wisq.

2. Użu żgħir wisq tat-tessut jista 'jirriżulta fl-ebda estrazzjoni tad-DNA ġenomika korrispondenti.

Rakkomandazzjoni: Segwi l-buccal Istruzzjonijiet tat-teħid ta 'kampjuni tat-tampuni fil-gwida ta' l-operazzjoni, u imsaħ kemm jista 'jkun sabiex biżżejjed ċelloli jkunu jistgħu jitwaħħlu mat-tampuni orali għall-estrazzjoni tad-DNA ġenomika;għall-estrazzjoni tal-kampjuni tal-post tad-demm, iż-żona tat-tqattigħ tal-post tad-demm tista 'tiżdied b'mod xieraq.

3. Foregene Protease huwa ppreservat b'mod mhux xieraq, li jirriżulta fi tnaqqis fl-attività jew inattivazzjoni tiegħu.

Rakkomandazzjoni: Ikkonferma l-kundizzjonijiet tal-ħażna ta 'il-Foregene Protease jew tibdilha b'Foregene Protease ġdid għal reazzjoni enżimatika.

4. Il-preservazzjoni mhux xierqa tal-kit jew il-ħin tal-ħażna hija twila wisq, li tirriżulta fil-falliment ta 'xi komponenti fil-kit.

Rakkomandazzjoni: Xiri ġdidBukkali tajjara tad-DNAiżolament kit għal proċeduri relatati.

5. Buffer WB ma jżidx etanol assolut.

Rakkomandazzjoni: Ikkonferma li l-buffer WB iżid il-volum korrett ta' etanol assolut.

6. L-eluwent mhuwiex miżjud b'mod korrett mal-film tas-silikon.

Rakkomandazzjoni: Żid 65°Cl-eluwent imsaħħan minn qabel jinżel fin-nofs tal-membrana tas-silikon u ħalli f'temperatura tal-kamra għal 5 min biex tiżdied l-effiċjenza ta 'l-elużjoni.

LDNA ġenomika b'rendiment baxx iżolati

Il-kawżi possibbli li ġejjin huma kif ġej:

1. Preservazzjoni mhux xierqa tal-kampjuni jew ħażna għal żmien twil wisq twassal għal degradazzjoni tad-DNA ġenomika.

Rakkomandazzjoni: Tampuni orali preferibbilment jittieħdu kampjuni friski, u tampuni ippreservati m'għandhomx jintużaw għall-estrazzjoni tad-DNA ġenomika.

2. Jekk l-ammont ta 'kampjun tat-tessut huwa żgħir wisq, il-kontenut ta' DNA ġenomika estratt ikun inqas.

Rakkomandazzjoni: Segwi l-istruzzjonijiet tat-teħid tal-kampjuni tat-tampuni orali fil-gwida tat-tħaddim, imsaħ kemm jista 'jkun sabiex biżżejjed ċelloli jkunu jistgħu jitwaħħlu mat-tampuni orali għall-estrazzjoni tad-DNA ġenomika.

3. Foregene Protease huwa ppreservat b'mod mhux xieraq, li jirriżulta fi tnaqqis fl-attività jew inattivazzjoni tiegħu.

Rakkomandazzjoni: Ikkonferma l-kundizzjonijiet tal-ħażna ta 'the Foregene Protease jew tibdilha b'ġdida Foregene Protease għal reazzjoni enżimatika.

4. Problemi tal-eluent.

Rakkomandazzjoni: Uża Buffer EB għall-elużjoni;jekk tuża ddH2O jew eluwenti oħra, ikkonferma li l-pH tal-eluat huwa bejn 7.0-8.5.

5. L-eluat mhux miżjud b'mod korrett qatra.

Rakkomandazzjoni: Żid qtar ta 'eluwent fin-nofs tal-membrana tas-silikonju u ħalli f'temperatura tal-kamra għal 5 min biex tiżdied l-effiċjenza ta' l-elużjoni.

6. Il-likwidu tal-elużjoni jakkumula ftit wisq.

Rakkomandazzjoni: Uża l-eluwent għall-elużjoni tad-DNA ġenomika kif meħtieġ fl-istruzzjonijiet, mill-inqasmhux inqas minn 15μl.

Low purità of DNA ġenomikaiżolati

Purità baxxa tad-DNA ġenomika tista 'twassal għal falliment jew riżultati mhux sodisfaċenti ta' esperimenti downstream, bħal: enżimi ma jistgħux jinqatgħu miftuħa, PCR ma tistax tikseb il-framment tal-ġene ta 'interess, eċċ.

Il-kawżi possibbli huma kif ġej:

1. Tniġġis ta 'eteroproteini, tniġġis ta' RNA.

Analiżi: Il-kolonna tal-purifikazzjoni ma ġietx maħsula bl-użu ta 'Buffer PW;il-kolonna tal-purifikazzjoni tal-ħasil tal-Buffer PW ma ġietx maħsula bl-użu tal-veloċità ċentrifugali korretta.

Rakkomandazzjoni: Żgura li ma jkunx hemm preċipitazzjoni fis-supernatant qabel ma żżid l-etanol;kun żgur li taħsel il-kolonna tal-purifikazzjoni skont l-istruzzjonijiet, u dan il-pass ma jistax jitħalla barra.

2. Tniġġis ta 'jone ta' impurità.

Analiżi: Il-kolonna tal-purifikazzjoni tal-ħasil tal-buffer WB tħalla barra jew inħaslet darba biss, li rriżultat f'kontaminazzjoni jonika residwa.

Rakkomandazzjoni: Kun żgur li taħsel Buffer WB 2 darbiet kif ordnat biex tneħħi joni residwi kemm jista 'jkun.

3. Kontaminazzjoni ta 'enzimi RNA.

Analiżi: RNases barranin ġew miżjuda mal-buffer;L-operazzjoni tal-ħasil tal-buffer PW ma kinitx korretta, li rriżultat f'residwi ta 'RNase, li affettwaw operazzjonijiet sperimentali ta' RNA downstream, bħal traskrizzjoni in vitro.

Rakkomandazzjoni: Foregene serje nuklejku aċiduiżolakits ta’ zjoni jistgħu jneħħu l-RNA mingħajr żieda addizzjonali ta’ RNase,għalhekk Tampun buckali/Kit ta' iżolament tad-DNA tal-Kard FTAmeħtieġa't żid RNase;kun żgur li ssegwi l-istruzzjonijiet għall-kolonna tal-purifikazzjoni tal-ħasil tal-Buffer PW, u dan il-pass ma jistax jitħalla barra.

4. Residwu tal-etanol.

Analiżi: Buffer WB ma wettaqx ċentrifugazzjoni ta 'tubu vojt wara li ħasel il-kolonna tal-purifikazzjoni.

Rakkomandazzjoni: Wettaq l-operazzjoni korretta ta 'ċentrifugazzjoni ta' tubu vojt skond l-istruzzjonijiet.

5. Tniġġis ieħor ta 'impurità.

Analiżi: Kampjuni ffrankati jew kampjuni speċjali mhumiex ittrattati minn qabel.

Rakkomandazzjoni: Ittratta bir-reqqa l-kampjun kif intqal.

 


Ħin tal-post: Mar-18-2022