• facebook
  • linkedin
  • youtube

https://www.foreivd.com/animal-total-rna-isolation-kit-product/

FAQ's għalKit ta' iżolament ta' RNA totali ta' l-annimali

L-analiżi li ġejja tal-problemi li tista’ tiltaqa’ fihomestrazzjoni ta' RNA tat-tessuti/ċelluli ta' l-annimali will help you with your experiments. In addition, for other experimental or technical problems in addition to operating instructions and problem analysis, we have dedicated technical support to help you. If you have any needs, please contact us at: 028-83360257 or E-mali : Tech@foregene.com.

L-RNA ma jiġix estratt jew ir-rendimenti tal-RNA huma baxxi

Ħafna drabi jkun hemm varjetà ta 'fatturi li jaffettwaw l-effiċjenza tal-irkupru, bħal: kontenut ta' RNA tal-kampjun tat-tessut, metodu ta 'tħaddim, volum ta' elużjoni, eċċ.

1. Banju tas-silġ jew ċentrifugazzjoni krijoġenika (4 °C) saret waqt it-tħaddim.

Rakkomandazzjoni: Opera f'temperatura tal-kamra (15-25 ° C) matul il-proċess kollu, m'għandekx banju tas-silġ u ċentrifuga f'temperaturi baxxi.

2. Preservazzjoni mhux xierqa tal-kampjun jew ħin eċċessiv tal-ħażna tal-kampjun.

Rakkomandazzjoni: Aħżen il-kampjuni f'-80 °C jew iffriżar f'nitroġenu likwidu u evita l-użu ripetut ta 'friża u tinħall;ipprova uża tessut frisk jew ċelloli kkultivati ​​għall-estrazzjoni tal-RNA.

3. Liżi tal-kampjun insuffiċjenti.

Rakkomandazzjoni: Meta t-tessut ikun omoġenizzat, kun żgur li t-tessut ikun omoġenizzat biżżejjed u li ċ-ċelloli tat-tessuti huma maqsuma biżżejjed biex jispjegaw ir-rilaxx tal-RNA.

4. L-eluwent mhux miżjud b'mod korrett.

Rakkomandazzjoni: Ikkonferma li RNase-Free ddH2O huwa miżjud qatra fin-nofs tal-membrana tal-kolonna tal-purifikazzjoni.

5. Il-volum korrett ta' etanol assolut ma ġiex miżjud ma' Buffer RL2 jew Buffer RW2.

Rakkomandazzjoni: Segwi l-istruzzjonijiet, żid il-volum korrett ta 'etanol assolut ma' Buffer RL2 u Buffer RW2 u ħawwad sew qabel tuża l-kit.

6. Id-dożaġġ tal-kampjun tat-tessut mhuwiex xieraq.

Rakkomandazzjoni: Uża 10-20 mg ta 'tessut jew (1-5) × 106ċelluli għal kull 500 μl buffer RL1, peress li l-użu eċċessiv tat-tessut jista 'jirriżulta f'estrazzjoni ta' RNA mnaqqsa.

7. Volum ta 'elużjoni mhux xieraq jew elużjoni mhux kompluta.

Rakkomandazzjoni: Il-volum ta 'eluzzjoni tal-kolonna tal-purifikazzjoni huwa 50-200 μl;jekk l-effett ta 'elużjoni ma jkunx sodisfaċenti, huwa rakkomandat li jiġi estiż il-ħin tat-tqegħid fit-temperatura tal-kamra wara li żżid ddH Ħieles minn RNase imsaħħan minn qabel2O, eż. għal 5-10 min.

8.Il-kolonna ta 'purifikazzjoni għandha residwu ta' etanol wara l-ħasil tal-Buffer RW2.

Rakkomandazzjoni: Jekk ikun hemm residwu tal-etanol wara l-ħasil tal-Buffer RW2, ċentrifugazzjoni ta 'tubu vojt għal 1min, il-ħin għall-operazzjoni ta' ċentrifugazzjoni ta 'tubu vojt jista' jiżdied għal 2min, jew il-kolonna ta 'purifikazzjoni tista' titqiegħed f'temperatura tal-kamra għal 5 min biex tneħħi b'mod adegwat l-etanol residwu.

RNA purifikat huwa degradat

Il-kwalità tal-RNA purifikat hija relatata ma 'fatturi bħall-preservazzjoni tal-kampjun, kontaminazzjoni RNase, u manipulazzjoni, eċċ.

1. Il-kampjuni tat-tessuti ma jinżammux fil-ħin.

Rakkomandazzjoni: Jekk il-kampjuni tat-tessuti jew iċ-ċelloli ma jintużawx fil-ħin wara l-ġbir, ippriserva immedjatament krijopreserva f'-80 °C jew nitroġenu likwidu.Biex tiġbed l-RNA, uża kampjun tat-tessut jew taċ-ċelluli li jkun għadu kif ttieħed kull meta jkun possibbli.

2. Iffriżar-tidwib ripetut tal-kampjuni tat-tessuti.

Rakkomandazzjoni: Meta taħżen kampjuni tat-tessuti, huwa aħjar li tnaqqashom f'biċċiet żgħar għall-preservazzjoni, u neħħi waħda mill-biċċiet meta tużahom biex tevita tidwib ripetut tal-friża tal-kampjun u d-degradazzjoni tal-RNA.

3. RNase jiġi introdott jew le liebes ingwanti, maskri, eċċ li jintremew wara l-operazzjoni.

Rakkomandazzjoni: L-esperimenti ta 'estrazzjoni ta' RNA jsiru l-aħjar fi kmamar separati ta 'manipulazzjoni ta' RNA u t-tabella titneħħa qabel l-esperiment.

Ilbes ingwanti u maskri li jintremew waqt l-esperiment biex timminimizza d-degradazzjoni tal-RNA kkawżata mill-introduzzjoni ta 'RNase.

4. Ir-reaġenti huma kkontaminati b'RNase waqt l-użu.

Rakkomandazzjoni: Ibdel b'Kit ġdid għall-Iżolament tal-RNA Totali tal-Annimali għal esperimenti relatati.

5. It-tubi taċ-ċentrifugi, il-ponot, eċċ użati fil-manipulazzjoni tal-RNA huma kkontaminati b'RNase.

Rakkomandazzjoni: Ikkonferma li t-tubi taċ-ċentrifugi, il-ponot, il-pipetti, eċċ użati fl-estrazzjoni tal-RNA huma kollha Ħieles mill-RNase.

L-RNA miksub purifikat jaffettwa l-esperimenti downstream

RNA purifikat mill-kolonna tal-purifikazzjoni, jekk il-jonji tal-melħ, il-kontenut tal-proteini huwa kbir wisq jaffettwa l-esperiment downstream, bħal: traskrizzjoni inversa,Northern Blot et al.

1. L-RNA elutionit għandu residwi tal-jone tal-melħ.

Rakkomandazzjoni: Ikkonferma li l-volum korrett ta 'etanol ġie miżjud mal-Buffer RW2 u wettaq 2 ħasliet ta' kolonna ta 'purifikazzjoni bil-veloċità ċentrifugali indikata għat-tħaddim;jekk ikun hemm xi residwu tal-jone tal-melħ, ħalli l-kolonna tal-purifikazzjoni għal Buffer RW2 għal 5 min f'temperatura tal-kamra u wettaq ċentrifugazzjoni biex timmassimizza t-tneħħija tal-kontaminazzjoni tal-melħ.

2. Residwu ta' etanol f'RNA elutionit.

Rakkomandazzjoni: Ikkonferma li wara l-ħasil tal-buffer RW2, wettaq l-operazzjoni ta 'ċentrifugazzjoni ta' tubu vojt fil-veloċità ta 'ċentrifugazzjoni indikata għall-operazzjoni, żid il-ħin tal-operazzjoni ta' ċentrifugazzjoni ta 'tubu vojt għal 2 min jekk għad hemm residwu ta' etanol, jew ħalliha f'temperatura tal-kamra għal 5 minuti wara ċ-ċentrifugazzjoni ta 'tubu vojt biex timmassimizza t-tneħħija ta' ethanol residuu.

Iżolament ta' tipi ta' kampjuni ta' aċidu nulċejku

Il-kits tal-Iżolament tal-RNA ta 'Foregene jistgħu jiksbu iżolament/estrazzjoni tal-RNA totali mis-sorsi tal-kampjuni li ġejjin: Tessut tal-annimali, pjanti, ċelloli, virali, demm, eċċ.

Kif naħżen il-kit

Ħażna f'temperatura tal-kamra għal 24 xahar.


Ħin tal-post: Mar-01-2022