• facebook
  • linkedin
  • youtube

RNase hija kelma sensittiva li ħafna studenti li spiss iwettqu esperimenti ta 'estrazzjoni ta' RNA ma jridux jisimgħu.Armat bis-sħiħ, l-RNA li finalment ġie estratt bir-reaġenti tossiċi ħafna fenol u kloroform ġie degradat.Jien mhux rikonċiljat!!!Illum, ejja nagħtu ħarsa lejn l-oriġini tal-famuż Rnase.

Ribonuclease (RNase), jew RNase, hija nukleażi li tista 'tidrolizza l-RNA f'molekuli żgħar.RNase, bħala proteina ta 'molekula żgħira, hija stabbli b'mod mhux tas-soltu .It-temperatura għolja konvenzjonali u l-isterilizzazzjoni tal-fwar bi pressjoni għolja u l-inibituri tal-proteini ma jistgħux jinattivawh kompletament.L-istabbiltà ta 'RNase ġejja prinċipalment mill-bonds disulfide fl-istruttura.Pereżempju, l-RNase użata b'mod komuni tal-frixa bovina għandha biss 124 aċidu amminiku, iżda fiha 4 bonds disulfide.Il-bond tal-kubrit u l-bond tad-disulfide jagħtu lil RNase bi stabbiltà termali eċċellenti.Barra minn hekk, rnase għandu piż molekulari relattivament żgħir u jista 'malajr jirrestawra l-konformazzjoni oriġinali tiegħu f'ħafna każijiet.

Minbarra li huma estremament stabbli,RNases huma kullimkien fil-laboratorju .RNase huwa mekkaniżmu ta 'difiża bijoloġika.Għal ċellula, l-RNA eżoġenu ħafna drabi huwa fatali.Meta mqabbel mad-DNA eżoġenu, l-RNA eżoġenu ħafna drabi huwa aktar perikoluż.L-RNA huwa traskritt u tradott bil-ferħ, għalhekk kważi l-organiżmi kollha evolvew RNases biex jiddefendu kontra l-invażjoni ta 'RNA eżoġenu.Għalhekk, iċ-ċelloli batteriċi kkultivati ​​fil-laboratorju u int li estratt l-RNA joħroġ l-aroma ta 'RNase.Fluwidi tal-ġisem tal-bniedem (bżieq, tiċrit, eċċ.) Fihom ammont kbir ta 'RNase, għalhekk tibkix meta l-RNA jiġi degradat.Iktar ma tibki, agħar tkun id-degradazzjoni tal-RNA!!Sister Daiyu mhix adattata għall-estrazzjoni tal-RNA!

Barra minn hekk, il-ġilda delikata tiegħek fiha wkoll ħafna RNase, u l-markers, il-pipetti, il-bibien tal-friġġ, u l-pumi tal-bibien li ġew mimsus mill-ġilda fihom ukoll RNase.

B'tant rambling, ejja nagħtu ħarsa lejn kif tittratta l-RNases.

L-ewwel ħaġa li kulħadd jaħseb meta jneħħi l-RNA hijaDEPC(pirokarbonat tad-dietil).DEPC prinċipalment jiddenatura l-proteina billi jikkombina maċ-ċirku imidazole tal-grupp attiv RNase histidine, u b'hekk jinibixxi l-attività tal-enzima.0.1% DEPC jista 'jkollu effett ta' tneħħija aħjar fuq Rnase, iżda għandna bżonn nagħtu attenzjoni li DEPC huwa karċinoġenu magħruf, għalhekk għandha tingħata attenzjoni speċjali meta tużah.

Għal RNase, irridu nibdew minn żewġ aspetti,l-ewwel huwa li jinibixxi l-attività ta 'RNase endoġenu

Reaġenti konvenzjonali ta 'estrazzjoni ta' RNA bħal guanidine isothiocyanate u DTT li jinsabu fi Trizol jistgħu jiftħu r-rabta disulfide ta 'RNase, iżda għad hemm xi RNases, speċjalment f'kampjuni tat-tessuti, għalhekk agħti attenzjoni għal temperatura baxxa.

1.Immedjatament għaddas il-kampjun tat-tessut fin-nitroġenu likwidu wara li toħroġ, jew f'soluzzjoni kummerċjali ta' preservazzjoni ta' RNA.

2.Wara li tkun estratt l-RNA tal-kampjun taċ-ċellula, żidha mas-soluzzjoni tal-liżi u lyse fuq il-kaxxa tas-silġ

3. Huwa aħjar li tuża nitroġenu likwidu għat-tħin meta l-kampjuni tat-tessuti jkunu omoġenizzati.Meta tuża omoġenizzatur elettriku mingħajr nitroġenu likwidu, agħti attenzjoni biex tkessaħ kompletament minn qabel l-adapter omoġenizzat.

sgre (2)

It-tieni huwa DNase eżoġenu

1.Kun armat bis-sħiħ, ilbes kowt tal-laboratorju, ilbes maskra, u kun żgur li tilbes par ingwanti ġodda (ma tkunx daqshekk thrifty!! Għandu jiġi nnutat li Trizol huwa super korrużiv, u huwa wkoll b'saħħtu ħafna permezz ta 'ingwanti, sabiex ma taqtirx fuq idejk).

2.It-truf tal-pipetta kollha użati, tubi EP, tubi PCR u tagħmir ieħor għandhom jiġu ttrattati b'de-RNase.Jista 'jiġi mxarrba f'0.1% DEPC u mbagħad taħt pressjoni taħt pressjoni għolja.Oqgħod attent għall-operazzjoni f'kappa tad-dħaħen.Tiranni lokali jistgħu jixtru direttament konsumabbli għat-tneħħija tal-enzimi.

PS: Ħa ngħidilkom metodu għażżien.Għalkemm temperatura għolja u pressjoni għolja ma jistgħux ineħħu kompletament l-RNase, se tneħħi parti kbira minnha.2 darbiet ta 'temperatura għolja u pressjoni għolja għandha effett tajjeb, u l-estrazzjoni ta' RNA għandha ftit effett.

3.L-alkoħol jista' jiddenatura l-proteini,sabiex it-tabella tal-estrazzjoni tal-RNA tista 'tintmesaħ b'75% alkoħol , u l-ingwanti jistgħu wkoll jiġu sprejjati bl-alkoħol.

4.Is-soluzzjoni finali li tħoll l-RNA u t-tubu taċ-ċentrifuga għandhom ukoll jiġu ttrattati de-RNase.L-ilma DEPC huwa soluzzjoni li tinħall RNA użata b'mod komuni.Ejja nitkellmu dwar il-metodu ta 'preparazzjoni korrett tal-ilma DEPC (ftakar li terġa' tippakkja d-DEPC kummerċjali meta tixtrih)

Żid DEPC ma 'ilma ultrapur f'1:1000, ħawwad sew, ħalli toqgħod matul il-lejl f'37 ° C, u sterilizza f'121 ° C taħt temperatura għolja u pressjoni għolja għal 15-il minuta.L-ilma DEPC jista 'jinħażen f'-20°C f'alikwoti ta' 1ml.

Fl-aħħar nett, fil-qosor: it-temperatura baxxa hija ċ-ċavetta, il-konsumabbli huma mmaniġġjati tajjeb, armati bis-sħiħ u inqas jitkellmu!

Ukoll, dak huwa għall-istrateġija tal-lum.Nawguralkom il-konċentrazzjoni u l-purità kollha tal-RNA li semmejt.Iż-żewġ A260/A280 huma 2.0!!!

Naturalment, jekk tuża aoperazzjoni f'temperatura tal-kamra RNA estrazzjoni kit, inti tista 'ma tiltaqa' ma 'l-inkwiet ta' hawn fuq.

Operazzjoni f'temperatura tal-kamra, mingħajr ma żżid DNase, estratti RNA totali miċ-ċelloli fi 11-il minuta, u estratti RNA totali minn tessuti tal-annimali jew pjanti fi 30 minuta.

Għal kampjuni ta' prova, jekk jogħġbok ikkuntattja:overseas@foregene.com

Prodotti Relatati:

https://www.foreivd.com/cell-total-rna-isolation-kit-product/

https://www.foreivd.com/animal-total-rna-isolation-kit-product/

https://www.foreivd.com/plant-total-rna/

sgre (1)sgre (3)


Ħin tal-post: Awissu-25-2022