Introduzzjoni:

RNA, isem xjentifiku aċidu ribonuklejku, l-abbrevjazzjoni tagħha ġejja minn RiboNucleic Acid, huwa tip ta 'aċidu nuklejku ffurmat billi tgħaqqad mill-inqas għexieren ta' ribonukleotidi permezz ta 'bonds fosfodiesteri.

Il-premessa ta 'l-esplorazzjoni ta' l-RNA hija li jiġi estratt RNA Totali mingħajr tniġġis, u l-prinċipju bażiku ta 'l-estrazzjoni ta' l-RNA jista 'jiġi mqassar bejn wieħed u ieħor kif ġej:

1. Jfixkel iċ-ċelloli l-ewwel

2. Imbagħad neħħi l-impuritajiet makromolekulari (proteini, lipidi, DNA, eċċ.)

3. Fl-aħħarnett, l-RNA jiġi preċipitat waqt li jitneħħew l-imluħa u s-solventi organiċi, u jkompli jippurifika l-RNA

Passat u preżenti tal-metodu ta 'estrazzjoni

L-ewwel ġenerazzjoni ta 'metodu ta' estrazzjoni ta 'RNA huwa l-metodu ta' preċipitazzjoni TRIzol (reaġenti użati jinkludu guanidine isothiocyanate, phenol, chloroform, eċċ.) Ivvintat minn nannu jismu Piotr Chomczynski u nannu Nicoletta Sacchi, minħabba li din l-invenzjoni tippermetti estrazzjoni ta 'RNA malajr u faċli, minn dakinhar bdiet iż-żieda fir-riċerka RNA.

Aktar tard, in-nannu biegħ din il-privattiva lil Invitrogen, u Invitrogen ippromwova dan il-metodu lid-dinja u sar metodu użat ħafna.

Aktar tard, Invitrogen ġie akkwistat minn Thermo!

Prodott rappreżentattiv: Reaġent TRIzol ta 'Invitrogen

Madankollu, il-metodu ta 'preċipitazzjoni TRIzol jeħtieġ preċipitazzjoni multipla u estrazzjoni ta' RNA, u r-reaġenti użati huma tossiċi u jieħdu żmien twil biex joperaw.

Għalhekk, daħal fis-seħħ il-metodu ta 'purifikazzjoni tal-kolonna-enżima tat-tieni ġenerazzjoni, bl-użu tal-membrana tal-ġel tas-silika bħala materjal speċifiku ta' adsorbiment ta 'aċidu nuklejku biex jimmassimizza l-irkupru ta' RNA fil-kampjun filwaqt li jitneħħew impuritajiet oħra.

Il-metodu tat-tieni ġenerazzjoni jissimplifika l-operazzjoni fuq il-bażi ta 'prestazzjoni stabbli, inaqqas il-fattur tar-riskju, u jtejjeb l-effiċjenza tal-estrazzjoni tal-RNA.

Prodotti rappreżentattivi: QIAGEN RNeasy u l-biċċa l-kbira tal-prodotti domestiċi

Madankollu, kemm l-ewwel kif ukoll it-tieni metodi ta 'ġenerazzjoni jeħtieġu l-użu ta' DNase biex titneħħa l-kontaminazzjoni tad-DNA, li ġġib xi inkonvenjent għal esperimenti downstream sussegwenti.Id-DNase residwu se jnaqqas l-effiċjenza tat-traskrizzjoni inversa u jnaqqas is-sintesi tal-cDNA tal-ewwel fergħa, u b'hekk jaffettwa l-eżattezza tar-riżultati.

Għalhekk, il-metodu ta 'estrazzjoni tat-tielet ġenerazzjoni huwa ottimizzat fuq il-bażi tat-tieni ġenerazzjoni.L-esperiment m'għandux għalfejn iżid xi enzimi, u l-RNA jista 'jinkiseb faċilment b'żewġ kolonni biss.

Kolonna 1: Kolonna tat-Tindif tad-DNA biex tnaddaf id-DNA

Kolonna 2: Kolonna ta' RNA biss tassorbi u tirkupra RNA speċifikament

Operazzjoni sempliċi bħal din mhux biss tiffranka l-ħin, iżda tiffaċilita wkoll it-tħaddim ta 'esperimenti downstream!

Prodotti rappreżentattivi: QIAGEN RNeasy Plus uForegeneprodotti serje purifikazzjoni RNA

（RNeasy Plus）

（Foregene'sKit tal-Iżolament tal-RNA Totali tal-Pjanti）

Għidlek bil-kwiet!Il-kit RNA ta 'Foregene jippreżenta wkoll RNase Eraser super faċli biex jintuża, li jista' jneħħi kompletament 400μg ta' RNase fuq il-wiċċ solidu f'minuta 1, mingħajr ma żżid xi sustanzi tossiċi mal-ġisem tal-bniedem!

Pic1: Tabella ta 'tqabbil tal-proċess operattiv

Il-prodotti ta 'Foregene jistgħu jlestu l-estrazzjoni tal-RNA f'żewġ kanzunetti biss, ma tagħmilx lil oħrajn jealous tal-progress tal-esperiment tiegħek!

Pic2:Eriżultati sperimentali tabella ta' paragun

L-ewwel ġenerazzjoni (1: TRIzol)

It-tieni ġenerazzjoni (2: RNeasy ta 'QIAGEN)

It-tielet ġenerazzjoni (3: QIAGEN's RNeasy plus, 4: Foregene)

Pic3: graff qPCR (graff tal-kurva ta 'amplifikazzjoni)

L-ewwel ġenerazzjoni (aħdar tfisser TRIzol -, aħmar ifisser TRIzol +)

It-tieni ġenerazzjoni (sema blu tfisser QIAGEN RNeasy-, aħmar ifisser QIAGEN RNeasy +)

It-tielet ġenerazzjoni (blu tfisser QIAGEN RNeasy plus, aħdar tfisser Foregene)

(Nota: qPCR graph "-" tindika li DNase ma ġiex miżjud u l-kontaminazzjoni tad-DNA ma tneħħietx. Għalhekk, is-CT huwa ogħla u r-riżultat mhux preċiż; "+" jindika li DNase ġie miżjud u l-kontaminazzjoni tad-DNA tneħħiet, ir-riżultat huwa preċiż)

Kull titjib tekniku jfisser li t-tħaddim tal-esperiment qed jiżviluppa f'direzzjoni aktar sempliċi u faċli għall-utent.

Foregene għandu l-għan li jgħin aktar riċerkaturi xjentifiċi jiffrankaw ħin u spiża sperimentali, jiksbu riżultati sperimentali ta 'kwalità għolja, u flimkien joħolqu kisbiet ta' riċerka xjentifika aktar siewja.