L-antikorpi, imsejħa wkoll immunoglobulini (Ig), huma glikoproteini li jingħaqdu speċifikament mal-antiġeni.
 
Preparazzjoni ta 'antikorpi konvenzjonali hija prodotta billi l-annimali jiġu immunizzati u l-ġbir ta' l-antiserum.Għalhekk, l-antiserum ġeneralment ikun fih antikorpi kontra antiġeni oħra mhux relatati u komponenti oħra tal-proteini fis-serum.Il-molekuli ta 'antiġen ġenerali fihom l-aktar epitopi differenti multipli, għalhekk l-antikorpi konvenzjonali huma wkoll taħlita ta' antikorpi kontra epitopi differenti multipli.Anke l-antikorpi tas-serum konvenzjonali diretti kontra l-istess epitope għadhom komposti minn antikorpi eteroġenji prodotti minn kloni differenti taċ-ċelluli B.Għalhekk, antikorpi tas-serum konvenzjonali jissejħu wkoll antikorpi poliklonali, jew antikorpi poliklonali fil-qosor.
 
Antikorp monoklonali (antikorp monoklonali) huwa antikorp uniformi ħafna prodott minn klonu wieħed taċ-ċelluli B u dirett biss kontra epitope speċifiku.Normalment ikun ippreparat permezz tat-teknoloġija tal-hybridoma — it-teknoloġija tal-antikorpi tal-ibridoma hija bbażata fuq it-teknoloġija tal-fużjoni taċ-ċelluli, li tgħaqqad ċelluli B mal-kapaċità li tnixxi antikorpi speċifiċi u ċelluli tal-majeloma b'kapaċità ta 'tkabbir infinita f'ibridomi taċ-ċelluli B.Din iċ-ċellula ibridoma għandha l-karatteristiċi ta 'ċellula ġenitur.Jista 'jipprolifera b'mod indefinit u immortali in vitro bħal ċelluli tal-majeloma, u jista' jissintetizza u joħroġ antikorpi speċifiċi bħal limfoċiti tal-milsa.Permezz tal-klonazzjoni, linja monoklonali derivata minn ċellula ta 'hybridoma waħda, jiġifieri, linja ta' ċelluli ta 'hybridoma, tista' tinkiseb.L-antikorpi li jipproduċi huma antikorpi omoġenji ħafna kontra l-istess determinant antiġeniku, jiġifieri, antikorpi monoklonali.
 
L-antikorpi jeżistu bħala monomeru wieħed jew aktar f'forma ta' Y (jiġifieri, antikorpi monoklonali jew antikorpi poliklonali).Kull monomeru f'forma ta 'Y huwa magħmul minn 4 ktajjen polipeptidi, inklużi żewġ ktajjen tqal identiċi u żewġ ktajjen ħfief identiċi.Katina ħafifa u katina tqila huma msemmija skond il-piż molekulari tagħhom.Il-parti ta 'fuq tal-istruttura f'forma ta' Y hija r-reġjun varjabbli, li huwa s-sit li jgħaqqad l-antiġenu.(Silta minn Detai Bio-Monoclonal Antibody Concept)
 
Struttura tal-antikorpi
Katina tqila
Hemm ħames tipi ta’ ktajjen tqal ta’ mammiferi Ig, imsemmija bl-ittri Griegi α, δ, ε, γ, u μ.L-antikorpi korrispondenti jissejħu IgA, IgD, IgE, IgG, u IgM.Ktajjen tqal differenti jvarjaw fid-daqs u l-kompożizzjoni.α u γ fihom madwar 450 aċidu amminiku, filwaqt li μ u ε fihom madwar 550 aċidu amminiku.
Kull katina tqila għandha żewġ reġjuni: ir-reġjun kostanti u r-reġjun varjabbli.L-antikorpi kollha tal-istess tip għandhom l-istess reġjun kostanti, iżda hemm differenzi bejn antikorpi ta 'tipi differenti.Ir-reġjuni kostanti tal-ktajjen tqal γ, α, u δ huma komposti minn tliet oqsma Ig flimkien, b'reġjun taċ-ċappetta biex tiżdied il-flessibbiltà tiegħu;ir-reġjuni kostanti tal-ktajjen tqal μ u ε huma komposti minn 4 oqsma Ig.Ir-reġjun varjabbli tal-katina tqila tal-antikorp prodott minn ċelluli B differenti huwa differenti, iżda r-reġjun varjabbli tal-antikorp prodott mill-istess ċellula B jew klonu taċ-ċelluli huwa l-istess, u r-reġjun varjabbli ta 'kull katina tqila huwa ta' madwar 110 aċidi amminiċi fit-tul., U jiffurmaw dominju Ig wieħed.
 
Katina ħafifa
Hemm biss żewġ tipi ta 'ktajjen ħfief fil-mammiferi: tip lambda u tip kappa.Kull katina ħafifa għandha żewġ oqsma marbuta: reġjun kostanti u reġjun varjabbli.It-tul tal-katina ħafifa huwa ta 'madwar 211 ~ 217 aċidi amminiċi.Iż-żewġ ktajjen ħfief li jinsabu f'kull antikorp huma dejjem l-istess.Għall-mammiferi, il-katina ħafifa f'kull antikorp għandha tip wieħed biss: kappa jew lambda.F'xi vertebrati aktar baxxi, bħal ħut kartilaġinuż (ħut tal-qarquċa) u ħut tal-għadam, jinstabu wkoll tipi oħra ta 'ktajjen ħfief bħat-tip iota (iota).
 
Segmenti Fab u Fc
Is-segment Fc jista 'jiġi kkombinat direttament ma' enzimi jew żebgħa fluworexxenti biex tittikkettja l-antikorpi.Hija l-parti fejn l-antikorp rivets fuq il-pjanċa matul il-proċess ELISA, u hija wkoll il-parti fejn it-tieni antikorp huwa rikonoxxut u marbut fl-immunopreċipitazzjoni, immunoblotting u immunohistochemistry.L-antikorpi jistgħu jiġu idrolizzati f'żewġ segmenti F(ab) u segment wieħed Fc minn enzimi proteolitiċi bħal papain, jew jistgħu jinkisru mir-reġjun taċ-ċappetta b'pepsin u idrolizzati f'segment wieħed F(ab)2 u segment wieħed Fc.Il-frammenti tal-antikorpi IgG kultant huma utli ħafna.Minħabba n-nuqqas tas-segment Fc, is-segment F(ab) mhux se jippreċipita mal-antiġen, u lanqas ma jinqabad minn ċelloli immuni fi studji in vivo.Minħabba l-frammenti molekulari żgħar u n-nuqqas ta 'funzjoni ta' cross-linking (minħabba n-nuqqas ta 'segment Fc), is-segment Fab normalment jintuża għar-radjutikkettjar fi studji funzjonali, u s-segment Fc jintuża prinċipalment bħala aġent li jimblokka fit-tbajja istokimika.
 
Reġjuni varjabbli u kostanti
Ir-reġjun varjabbli (reġjun V) jinsab f'1/5 jew 1/4 (li fih madwar 118 residwi ta 'aċidu amminiku) tal-katina H ħdejn l-N-terminal u 1/2 (li fih madwar 108-111 residwi ta' amino acid) ħdejn l-N-terminal tal-katina L.Kull reġjun V għandu ċirku peptide ffurmat minn bonds disulfide intra-katina, u kull ċirku peptide fih bejn wieħed u ieħor 67 sa 75 residwi ta 'aċidu amminiku.Il-kompożizzjoni u l-arranġament tal-aċidi amminiċi fir-reġjun V jiddeterminaw l-ispeċifiċità tal-irbit tal-antiġen tal-antikorp.Minħabba t-tipi u s-sekwenza ta 'aċidi amminiċi li dejjem jinbidlu fir-reġjun V, jistgħu jiġu ffurmati ħafna tipi ta' antikorpi b'ispeċifiċitajiet ta 'antiġeni li jorbtu differenti.Ir-reġjuni V tal-katina L u l-katina H jissejħu VL u VH, rispettivament.F'VL u VH, il-kompożizzjoni u s-sekwenza tal-aċidu amminiku ta 'xi reġjuni lokali għandhom grad ogħla ta' varjazzjoni.Dawn ir-reġjuni jissejħu reġjuni ipervarjabbli (HVR).Il-kompożizzjoni u l-arranġament tal-aċidu amminiku tal-partijiet mhux HVR fir-reġjun V huma relattivament konservattivi, li jissejjaħ ir-reġjun tal-qafas.Hemm tliet reġjuni ipervarjabbli f'VL, normalment jinsabu f'residwi ta 'amino acid 24 sa 34 u 89 sa 97 rispettivament.It-tliet HVRs ta 'VL u VH jissejħu HVR1, HVR2 u HVR3, rispettivament.Ir-riċerka u l-analiżi tad-diffrazzjoni tal-kristall tar-raġġi X wrew li r-reġjun ipervarjabbli huwa tabilħaqq il-post fejn l-antiġen tal-antikorp jeħel, għalhekk jissejjaħ ir-reġjun li jiddetermina l-komplimentarjetà (CDR).L-HVR1, HVR2 u HVR3 ta 'VL u VH jistgħu jissejħu CDR1, CDR2 u CDR3 rispettivament.Ġeneralment, CDR3 għandu grad ogħla ta 'ipervarjabilità.Ir-reġjun ipervarjabbli huwa wkoll il-post ewlieni fejn jeżistu d-determinanti idjotipiċi tal-molekuli Ig.Fil-biċċa l-kbira tal-każijiet, il-katina H għandha rwol aktar importanti fl-irbit mal-antiġen.
Ir-reġjun kostanti (reġjun C)jinsab fi 3/4 jew 4/5 (bejn wieħed u ieħor mill-aċidu amminiku 119 sat-terminal C) tal-katina H ħdejn it-tmiem C u 1/2 (fih madwar 105 residwi ta 'aċidu amminiku) ħdejn it-terminal C tal-katina L.Kull reġjun funzjonali tal-katina H fih madwar 110 residwi ta 'aċidu amminiku, u fih ċirku ta' peptide magħmul minn 50-60 residwi ta 'aċidu amminiku konnessi minn bonds disulfide.Il-kompożizzjoni u l-arranġament tal-aċidu amminiku ta 'dan ir-reġjun huma relattivament kostanti fl-istess katina tal-isotip L Ig tal-annimal u l-istess katina tat-tip H.L-istess, jista 'biss jorbot speċifikament mal-antiġen korrispondenti, iżda l-istruttura tar-reġjun C tagħha hija l-istess, jiġifieri għandha l-istess antiġeniċità.L-antikorp sekondarju IgG anti-bniedem taż-żiemel (jew anti-antikorp) jista 'jiġi kkombinat maż-żewġ A taħlita ta' antikorpi (IgG) kontra eżotossini differenti sseħħ.Din hija bażi importanti għall-preparazzjoni ta 'antikorpi sekondarji u l-applikazzjoni tal-fluworexxeina, iżotopi, enżimi u antikorpi oħra ttikkettjati.
 
 
Prodotti Relatati:
Cell Direct RT-qPCR kit