Tampuni Buccali/Kit ta' iżolament tad-DNA tal-Karta FTA Estrazzjoni tad-DNA Ġenomika jew Kit ta' Purifikazzjoni minn Tampuni Bukkali
Deskrizzjoni tal-Kit:
Ippurifika malajr DNA ġenomika ta 'kwalità għolja minn kampjuni ta' swab buccal/FTA Card.
◮L-ebda kontaminazzjoni RNase:Il-Kolonna tad-DNA biss ipprovduta mill-kit tagħmilha possibbli li tneħħi l-RNA mid-DNA ġenomika mingħajr ma żżid RNase waqt l-esperiment, u tevita li l-laboratorju jiġi kkontaminat minn RNase eżoġenu.
◮Veloċità mgħaġġla:Foregene Protease għandha attività ogħla minn proteases simili, u tiddiġerixxi kampjuni tat-tessuti malajr;l-operazzjoni hija sempliċi, u l-operazzjoni ta 'estrazzjoni tad-DNA ġenomika tista' titlesta fi żmien 20-80 minuta.
◮Konvenjenti:Iċ-ċentrifugazzjoni titwettaq f'temperatura tal-kamra, u m'hemmx bżonn ta 'ċentrifugazzjoni f'temperatura baxxa ta' 4 ° C jew preċipitazzjoni ta 'l-etanol tad-DNA.
◮Sigurtà:Mhi meħtieġa l-ebda estrazzjoni ta' reaġent organiku.
◮Kwalita għolja:Id-DNA ġenomika estratta għandha frammenti kbar, l-ebda RNA, l-ebda RNase, u kontenut ta 'jone estremament baxx, li jista' jissodisfa r-rekwiżiti ta 'diversi esperimenti.
◮Sistema ta' mikro-eluzzjoni:Jista 'jżid il-konċentrazzjoni tad-DNA ġenomika, li hija konvenjenti għal skoperta jew esperiment downstream.
Deskrizzjoni
Dan il-kit jipprovdi metodu effiċjenti u rapidu biex tinkiseb DNA ġenomika ta 'konċentrazzjoni għolja minn tampuni tal-ħalq u FTA Card (tikek tad-demm).Bl-użu tal-kumpanija tagħna's uniku tad-DNA biss silika membrana spin kolonna u l-formula, flimkien ma ' Foregene Protease, konċentrazzjoni għolja, DNA ġenomika ta ' kwalità għolja jistgħu jiġu estratti fi 80 minuta.Il-kolonna ta 'purifikazzjoni żgħira ddisinjata apposta torbot id-DNA ġenomika, u d-DNA jista' jiġi eluwit b'ammont żgħir (15μl) sistema ta 'eluzzjoni biex tiżdied il-konċentrazzjoni tad-DNA ġenomika miksuba, li hija konvenjenti għal sejbien jew esperiment downstream.Il-kit jista 'jipproċessa kampjun wieħed jew aktar kull darba, u l-proċess ta' purifikazzjoni ma jeħtieġx estrazzjoni ta 'sustanzi organiċi bħal fenol, kloroform, u isopropanol jew preċipitazzjoni ta' etanol li jieħu ħafna ħin, u l-operazzjoni hija sempliċi u tiffranka l-ħin.
Speċifikazzjonijiet
50 Preparazzjoni
Komponenti tal-kit
| Buffer ST1 |
| Buffer ST2 |
| Akrilamid lineari |
| Buffer PW |
| Buffer WB |
| Buffer EB |
| Foregene Protease |
| Kolonna tad-DNA biss |
| Istruzzjonijiet |
Karatteristiċi u vantaġġi
-L-ebda kontaminazzjoni RNase: Il-Kolonna tad-DNA biss ipprovduta mill-kit tagħmilha possibbli li titneħħa RNA mid-DNA ġenomika mingħajr ma żżid RNase waqt l-esperiment, u tevita li l-laboratorju jiġi kkontaminat minn RNase eżoġenu.
-Veloċità mgħaġġla: Foregene Protease għandha attività ogħla minn proteases simili, tiddiġerixxi kampjuni malajr;operazzjoni sempliċi.
-Konvenjenti: Iċ-ċentrifugazzjoni titwettaq f'temperatura tal-kamra, u m'hemmx bżonn ta 'ċentrifugazzjoni f'temperatura baxxa ta' 4°C jew preċipitazzjoni ta 'l-etanol tad-DNA.
-Sigurtà: L-ebda estrazzjoni ta 'reaġent organiku hija meħtieġa.
-Kwalità għolja: Id-DNA ġenomika estratta għandha frammenti kbar, l-ebda RNA, l-ebda RNase, u kontenut ta 'jone estremament baxx, li jista' jissodisfa r-rekwiżiti ta 'diversi esperimenti.
-Sistema ta 'mikro-eluzzjoni: Tista' żżid il-konċentrazzjoni tad-DNA ġenomika, li hija konvenjenti għal skoperta jew esperiment downstream.
Applikazzjoni tal-kit
Huwa adattat għall-purifikazzjoni tad-DNA ġenomika mill-kampjuni li ġejjin: tampuni tal-ħalq, Karta FTA (tbajja tad-demm).
Ħażna u Żmien kemm idum tajjeb
-Dan il-kit jista 'jinħażen għal 12-il xahar taħt kundizzjonijiet niexfa f'temperatura tal-kamra (15-25 ° C);jekk jeħtieġ li jinħażen għal perjodu itwal ta 'żmien, jista' jinħażen f'2-8 °C.
Nota: Jekk tinħażen f'temperatura baxxa, is-soluzzjoni hija suxxettibbli għall-preċipitazzjoni.Qabel l-użu, kun żgur li tpoġġi s-soluzzjoni fil-kit f'temperatura ambjentali għal perjodu ta 'żmien.Jekk meħtieġ, saħħanha minn qabel f'banju ta 'l-ilma ta' 37 ° C għal 10 minuti biex tħoll il-preċipitat, u ħawwadha qabel l-użu.
-Foregene Protease soluzzjoni għandha formula unika, li hija attiva meta tinħażen f'temperatura tal-kamra għal żmien twil (3 xhur);l-attività u l-istabbiltà tiegħu se jkunu aħjar meta maħżuna f'4°C, għalhekk huwa rakkomandat li taħżen f'4°C, ftakar li ma żżommx f'-20°C.
Il-kolonna tal-purifikazzjoni hija misduda
F'dan il-kit, fl-operazzjoni ta 'estrazzjoni tad-DNA ġenomika, il-kolonna ta' purifikazzjoni hija adsorbita direttament fuq it-taħlita ta 'liżi enżimatika tal-kampjun mingħajr pass ta' ċentrifugazzjoni, u l-kolonna ta 'purifikazzjoni tista' tiġi mblukkata minħabba enżimizzazzjoni mhux kompluta u viskożità għolja tal-kampjun.
Il-kawżi possibbli li ġejjin huma kif ġej:
1. Diġestjoni enżimatika mhux kompluta tal-kampjuni tat-tessut.
Rakkomandazzjoni: Il-ħin tal-ipproċessar tal-kampjun ta 'Foregene Protease jista' jiġi estiż b'mod xieraq jew is-supernatant jista 'jittieħed wara ċentrifugazzjoni f'12,000 rpm (~13,400 × g) għal 5 min.
2. Użu eċċessiv ta 'kampjuni ta' tessuti jew tessuti kbar.
Rakkomandazzjoni: Huwa aħjar li ma taqbiżx 1 Tampun Buccal fil-kampjun;jekk il-kampjun huwa kbir wisq, żid id-dożaġġ ta 'Buffer ST1, Foregene Protease, buffer ST2 kif xieraq.
3. Il-viskożità tal-kampjun hija għolja wisq.
Rakkomandazzjoni: Il-kampjuni jistgħu jiġu dilwiti b'mod xieraq b'10 mM ta' Tris-HCl qabel l-estrazzjoni tad-DNA ġenomika.
4. Frammenti tal-karta tad-demm ġew miġbuda.
Rakkomandazzjoni: Il-ħin taċ-ċentrifugazzjoni temporanju tal-pass 6 tal-estrazzjoni ġenomika tal-post tad-demm (FTA Card) jista 'jiġi estiż b'mod xieraq.
Rendiment baxx jew ebda DNA
Ħafna drabi jkun hemm varjetà ta 'fatturi li jaffettwaw ir-rendiment tad-DNA ġenomika, inkluż l-oriġini tal-kampjun, il-kundizzjonijiet tal-ħażna tal-kampjun, il-preparazzjoni tal-kampjun, il-manipulazzjoni, eċċ.
Id-DNA ġenomika ma tistax tinkiseb waqt l-estrazzjoni
Il-kawżi possibbli huma kif ġej:
1. Preservazzjoni mhux xierqa tal-kampjuni jew ħażna għal żmien twil wisq twassal għal degradazzjoni tad-DNA ġenomika.
Rakkomandazzjoni: Tampuni orali għandhom preferibbilment jittieħdu kampjuni friski, u mhux rakkomandabbli li jintużaw tampuni ippreservati għal operazzjonijiet ta 'estrazzjoni tad-DNA ġenomika;kampjuni tal-post tad-demm għandhom jiżguraw li l-kwalità hija kwalifikata u l-ħin tal-ħażna m'għandux ikun twil wisq.
2. Użu żgħir wisq tat-tessut jista 'jirriżulta fl-ebda estrazzjoni tad-DNA ġenomika korrispondenti.
Rakkomandazzjoni: Segwi l-istruzzjonijiet tat-teħid tal-kampjuni tat-tampuni tal-ħalq fil-gwida tat-tħaddim, u imsaħ kemm jista 'jkun sabiex biżżejjed ċelloli jkunu jistgħu jitwaħħlu mat-tampuni orali għall-estrazzjoni tad-DNA ġenomika;għall-estrazzjoni tal-kampjuni tal-post tad-demm, iż-żona tat-tqattigħ tal-post tad-demm tista 'tiżdied b'mod xieraq.
3. Foregene Protease huwa ppreservat b'mod mhux xieraq, li jirriżulta fi tnaqqis fl-attività jew inattivazzjoni tiegħu.
Rakkomandazzjoni: Ikkonferma l-kundizzjonijiet tal-ħażna tal-Foregene Protease jew ibdelha b'Foregene Protease ġdid għal reazzjoni enżimatika.
4. Il-preservazzjoni mhux xierqa tal-kit jew il-ħin tal-ħażna hija twila wisq, li tirriżulta fil-falliment ta 'xi komponenti fil-kit.
Rakkomandazzjoni: Ixtri kit ta' iżolament tad-DNA tat-tampuni Buccal ġdid għal proċeduri relatati.
5. Buffer WB ma jżidx etanol assolut.
Rakkomandazzjoni: Ikkonferma li l-buffer WB iżid il-volum korrett ta' etanol assolut.
6. L-eluwent mhuwiex miżjud b'mod korrett mal-film tas-silikon.
Rakkomandazzjoni: Żid qtar ta 'eluwent imsaħħan minn qabel ta' 65 °C fin-nofs tal-membrana tas-silikon u ħalli f'temperatura tal-kamra għal 5 minuti biex iżżid l-effiċjenza ta 'l-elużjoni.
DNA ġenomika b'rendiment baxx iżolat
Il-kawżi possibbli li ġejjin huma kif ġej:
1. Preservazzjoni mhux xierqa tal-kampjuni jew ħażna għal żmien twil wisq twassal għal degradazzjoni tad-DNA ġenomika.
Rakkomandazzjoni: Tampuni orali preferibbilment jittieħdu kampjuni friski, u tampuni ippreservati m'għandhomx jintużaw għall-estrazzjoni tad-DNA ġenomika.
2. Jekk l-ammont ta 'kampjun tat-tessut huwa żgħir wisq, il-kontenut ta' DNA ġenomika estratt ikun inqas.
Rakkomandazzjoni: Segwi l-istruzzjonijiet tat-teħid tal-kampjuni tat-tampuni orali fil-gwida tat-tħaddim, imsaħ kemm jista 'jkun sabiex biżżejjed ċelloli jkunu jistgħu jitwaħħlu mat-tampuni orali għall-estrazzjoni tad-DNA ġenomika.
3. Foregene Protease huwa ppreservat b'mod mhux xieraq, li jirriżulta fi tnaqqis fl-attività jew inattivazzjoni tiegħu.
Rakkomandazzjoni: Ikkonferma l-kundizzjonijiet tal-ħażna tal-Foregene Protease jew ibdelha b'Foregene Protease ġdid għal reazzjoni enżimatika.
4. Problemi tal-eluent.
Rakkomandazzjoni: Uża Buffer EB għall-elużjoni;jekk tuża ddH2O jew eluwenti oħra, ikkonferma li l-pH tal-eluat huwa bejn 7.0-8.5.
5. L-eluat mhux miżjud b'mod korrett qatra.
Rakkomandazzjoni: Żid qtar ta 'eluwent fin-nofs tal-membrana tas-silikonju u ħalli f'temperatura tal-kamra għal 5 min biex tiżdied l-effiċjenza ta' l-elużjoni.
6. Il-likwidu tal-elużjoni jakkumula ftit wisq.
Rakkomandazzjoni: Uża l-eluwent għall-elużjoni tad-DNA ġenomika kif meħtieġ fl-istruzzjonijiet, mill-inqas mhux inqas minn 15 μl.
Purità baxxa ta 'DNA ġenomika iżolata
Purità baxxa tad-DNA ġenomika tista 'twassal għal falliment jew riżultati mhux sodisfaċenti ta' esperimenti downstream, bħal: enżimi ma jistgħux jinqatgħu miftuħa, PCR ma tistax tikseb il-framment tal-ġene ta 'interess, eċċ.
Il-kawżi possibbli huma kif ġej:
1. Tniġġis ta 'eteroproteini, tniġġis ta' RNA.
Analiżi: Il-kolonna tal-purifikazzjoni ma ġietx maħsula bl-użu ta 'Buffer PW;il-kolonna tal-purifikazzjoni tal-ħasil tal-Buffer PW ma ġietx maħsula bl-użu tal-veloċità ċentrifugali korretta.
Rakkomandazzjoni: Żgura li ma jkunx hemm preċipitazzjoni fis-supernatant qabel ma żżid l-etanol;kun żgur li taħsel il-kolonna tal-purifikazzjoni skont l-istruzzjonijiet, u dan il-pass ma jistax jitħalla barra.
2. Tniġġis ta 'jone ta' impurità.
Analiżi: Il-kolonna tal-purifikazzjoni tal-ħasil tal-buffer WB tħalla barra jew inħaslet darba biss, li rriżultat f'kontaminazzjoni jonika residwa.
Rakkomandazzjoni: Kun żgur li taħsel Buffer WB 2 darbiet kif ordnat biex tneħħi joni residwi kemm jista 'jkun.
3. Kontaminazzjoni ta 'enzimi RNA.
Analiżi: RNases barranin ġew miżjuda mal-buffer;L-operazzjoni tal-ħasil tal-buffer PW ma kinitx korretta, li rriżultat f'residwi ta 'RNase, li affettwaw operazzjonijiet sperimentali ta' RNA downstream, bħal traskrizzjoni in vitro.
Rakkomandazzjoni: Kits ta 'iżolament ta' aċidu nuklejku tas-serje Foregene jistgħu jneħħu l-RNA mingħajr żieda addizzjonali ta 'RNase, u għalhekk il-Kit ta' Iżolament tad-DNA tal-Kit tal-Iżolament tad-DNA tal-Kard Tampuni/FTA buccal m'għandux għalfejn iżid RNase;kun żgur li ssegwi l-istruzzjonijiet għall-kolonna tal-purifikazzjoni tal-ħasil tal-Buffer PW, u dan il-pass ma jistax jitħalla barra.
4. Residwu tal-etanol.
Analiżi: Buffer WB ma wettaqx ċentrifugazzjoni ta 'tubu vojt wara li ħasel il-kolonna tal-purifikazzjoni.
Rakkomandazzjoni: Wettaq l-operazzjoni korretta ta 'ċentrifugazzjoni ta' tubu vojt skond l-istruzzjonijiet.
5. Tniġġis ieħor ta 'impurità.
Analiżi: Kampjuni ffrankati jew kampjuni speċjali mhumiex ittrattati minn qabel.
Rakkomandazzjoni: Ittratta bir-reqqa l-kampjun kif intqal.
